عنوان پایان‌نامه
تراریزش خربزه به منظور افزایش مقاومت به بیمتری های قارچی
- رشته تحصیلی
- مهندسی تولیدات گیاهی- اصلاح گیاهان باغبانی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 46954;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 445;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 445
- تاریخ دفاع
- ۱۶ دی ۱۳۸۹
- دانشجو
- محمداسماعیل نداف خیرآبادی
- استاد راهنما
- محمود لطفی
- چکیده
- خربزه (Cucumis melo L.) از مهمترین محصولات باغبانی است که بیماریهای قارچی، یکی از مهمترین عوامل محدود کننده تولید آن می¬باشد؛ لذا تولید ارقام مقاوم، از اهمیت ویژه¬ای برخوردار است. کیتیناز و بتاگلوکاناز مهمترین آنزیم¬هایی هستند که مقاومت گیاه را به عوامل بیماریزای قارچی افزایش می¬دهند. بدین منظور، سازه ژنی حاوی ژن¬های کیتیناز و بتا 1و 3 گلوکاناز به همراه ژن گزینشگر مقاومت به کانامایسین (nptII) تحت راه¬انداز دائمی CaMV 35S، توسط آگروباکتریوم به ریزنمونه¬های لپه¬ای خربزه ایرانی رقم خاتونی، منتقل شد. ابتدا شرایط بهینه باززایی مستقیم ریزنمونه¬های رقم خاتونی بررسی شد؛ ریزنمونه¬های هفت روزه بیشترین باززایی شاخه را داشتند (64%). این ریزنمونه¬ها پس از 10، 30 و 60 ثانیه تلقیح با باکتری، به مدت یک، دو و سه روز برروی محیط جامد هم¬کشتی و در شرایط تاریکی قرار گرفتند. اثر تلقیح با هم¬کشتی مستقل از هم بودند و بیشترین نمونه¬های مقاوم و باززایی شاخه مقاوم، مربوط به تیمارهای 30 ثانیه تلقیح و هم-کشتی دو روزه بود. به منظور تفکیک نمونه¬های تراریخت، ریزنمونه¬ها به محیط انتخابی اندام¬زایی مستقیم حاوی هورمون BAP(mgl-1 1)، کانامایسین ( mgl-125) و سفوتاکسیم (mgl-1 300)، در شرایط نوری منتقل شدند. بعد از چند هفته، جوانه¬های شاخه مقاوم، به محیط انتخابی طویل¬سازی شاخه به همراه هورمون BAP (mgl-1 1/0)، GA3 (mgl-1 1) و کانامایسین (mgl-1 50) و سفوتاکسیم (mgl-1 300) منتقل شدند. سپس ساقه¬های طویل شده به محیط ریشه¬زایی حاوی هورمون IBA (mgl-1 1) بهمراه سفوتاکسیم (mgl-1 100) و بدون کانامایسین انتقال یافتند. به منظور اطمینان از حضور ژن¬های مورد نظر در گیاهچه¬های تراریخت، DNA ژنومی گیاهچه¬های باززایی شده و شاهد به روش CTAB استخراج گردید و تراریختی با استفاده از روش PCR ژنومی و به کمک آغازگرهای اختصاصی به اثبات رسید. واژه¬های کلیدی: اگروباکتریوم، انتقال ژن، اندام¬زایی مستقیم، عوامل بیماریزای قارچی، خربزه، کیتیناز، گلوکاناز
- Abstract
- Abstract Melon is one of the main important horticultural products that fungal diseases are one of the most importance restrictive agents, so the production of resistant cultivars is specefic important. Chitinase and ?-Glucanase enzymes are important in increases plant resistance to fungal pathogens; for this purpose, construct gene containing chitinase, ?-1, 3 glucanase gene and gene selector for Kanamycin resistance (nptII) under the permanent promoter CaMV/35S by Agrobacterium was transferred to cotyledonary explant of Persian melon (var. Khatooni). Direct organogenesis in 3, 5, 7, 10 and 12 –day explant were assessed; explants seven-day had the highest shoot regeneration (64%). The inoculated this explants after 10, 30 and 60 seconds with bacteria for 1, 2 and 3 days, were put on the co-culture solid medium in dark conditions. More resistant explant (10%) and regeneration shoot resistance (8%) was treatment related to time inoculation with 30 seconds and two days co-culture. In order to separate transformed plantlet, explants were transferred to direct organogenesis selective medium with BAP, kanamycin and cefotaxim in light conditions. After several weeks, the buds of shoot transformed were transferred to shoot elangation selective medium with BAP, GA3, kanamycin (more concentration) and cefotaxim, then the longed shoots were transferred to the root medium containing IBA and cefotaxim (without kanamycin). In order to analyze transformed plantlet, DNA genomic transgenic and control plantlet were extracted by CTAB method and tranformation in plants using PCR and primers specific was proven. Keywords: Agrobacterium, Chitinase, Direct organogenesis, Fungal pathogen, Gene transformation, Glucanase, Melon.
