عنوان پایان‌نامه
مطالعه تاثیر شوک حرارتی بر بیان mRNA ی ژن سرکوب گر تومور PTEN
- رشته تحصیلی
- بیوفیزیک
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 10841ب;کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 10841ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 46733
- تاریخ دفاع
- ۲۳ آذر ۱۳۸۹
- دانشجو
- میلاد افراسیابی
- استاد راهنما
- بهرام گلیائی
- چکیده
- PTEN یک فسفاتاز است که نقش بسیار مهمی در تنظیم مسیر های سیگنالی درون سلول ایفا می نماید. از جمله مهمترین واکنشهایی که این آنزیم کاتالیز می نماید، می توان به دفسفریله کردن PIP3 و تبدیل آن به PIP2 اشاره کرد. ژن PTEN در اصل یک می باشد و مشاهده شده که در %60 سرطان های پروستات عملکرد آن از دست رفته است. این ژن در حالت عادی در سلول بیان شده و دارای یک سطح پایه مشخص می باشد. واکنشی که PTEN در سلول کاتالیز می کند دقیقا معکوس عمل آنزیم PI3K می باشد. به همین دلیل PTEN به عنوان تنظیم کننده و مهار کننده ی مسیر PI3K/Akt شناخته می شود. در حالت عادی میان میزان فعالیت آنزیم های PTEN و PI3K در سلول توازن وجود دارد، امٌا درشرایط شوک حرارتی این توازن به هم می خورد و مسیر PI3K را فعال می کند و به تبع آن مسیر های پائین دست که در بقای سلولی نقش دارند نیز فعال می گردند. اینکه فعال شدن مسیر PI3K از طریق مهار PTEN می باشد یا فعال شدن خود آنزیم PI3K یا ترکیبی از هر دو، هنوز مشخص نیست. از سوی دیگر پروتئین PTEN بدون اعمال هر گونه تغییر کووالانی در ساختار آن فعال است واحتمالا تنظیم فعالیت آن در سطح نسخه برداری صورت می پذیرد. در این بررس میزان بیان mRNAی ژن PTEN در سلول های DU145 تحت اثر دماهای 43 و45 درجه سانتی گراد و زمان های مختلف حرارت دهی بررسی گردید. طبق نتایج بدست آمده تا 30 دقیقه زمان حرارت دهی، میزان نسخه برداری از ژن PTEN افزایش یافته که این افزایش همراه با کاهش کسر بقای سلول ها در همین بازه ی زمانی بوده است. اما بعد از 30 دقیقه حرارت دهی میزان نسخه برداری از این ژن تا سطح پایه کاهش می یابد که این توجیه کننده ی عدم مشاهده ی تغییرات معنی دار در میزان کسر بقای سلول بعد از 30 دقیقه تا 120 دقیقه حرارت می باشد. با توجه به این نتایج میتوان این احتمال را عنوان کرد که در زمان های بعد از 30 دقیقه همزمان با کاهش میزان PTEN در سطح نسخه برداری، فعالیت آنزیم PI3K نیز از طریق مکانیسم هایی که هنوز ناشناخته هستند افزایش می یابد و در نهایت سلول بقا می یابد.
- Abstract
- Introduction: PTEN (Phosphatase & TENsin homologue) is one of the most important intracellular inhibitors of PI3K/Akt pathway which its function leads to cell survival. PI3K/Akt pathway is activated by various agents and influencing cell survival through several mechanisms. One of them is activation of Heat Shock Protein expression in response to heat shock. In this study, mRNA level of PTEN gene has been assayed after heat treatment in different time periods in DU145 cell line. Materials and Methods: Cells were heated by floating in water bath in two distinct temperatures, 43 and 45°C for 4 different periods of time: 0, 30, 60 and 120 minutes. Control samples were incubated in 37°C for 2 hours. Heated cells were seeded in 60mm Petri dishes and the number of colonies was counted after 11 days. Heated cells were also used for total RNA extraction and RT-PCR experiment. Result: After 30 minutes of heat treatment in both temperatures, PTEN mRNA levels increased significantly while in the same period of time survival fraction of cells were decreased sharply. But after 30 minutes the PTEN mRNA level gets back to normal while the changes in survival fraction of the cells are insignificant in this period. Conclusion: These results confirm that there is a relationship between PTEN mRNA level and cell survival. When PTEN mRNA level increased in the cells, survival fraction decreased and vice versa. These findings are consistent with the fact that PTEN's main function in the cells is to enhance apoptosis in response to various stimuli including environmental stresses.
