عنوان پایان‌نامه
جدا سازی اکتینومایست های مولد آنتی بیوتیک بر علیه سالمونیلیاانتیریکا سوبسپ
- رشته تحصیلی
- زیست شناسی علوم میکروبیولوژی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: ۴۴۲۶;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 47747
- تاریخ دفاع
- ۱۸ مهر ۱۳۸۹
- دانشجو
- ساناز گلجانیان تبریزی
- استاد راهنما
- جواد حامدی
- چکیده
- چکیده در بررسی توانمندی خاک های ایران از نظر اکتینومایست های مولد آنتی بیوتیک بر علیه Salmonella enterica ssp. enterica ser. Typhi ، 37 نمونه خاک کشت و 522 جدایه اکتینومایست از نظر توان تولید آنتی بیوتیک به روش انتشار در چاهک برعلیه Salmonella typhi غربالگری شد. 9 سویه توانمند به دست آمد، که همه آنها دارای فعالیت ضدباکتریایی وسیع الطیف بودند; همچنین دو سویه (HG442 و HG443) فعالیت ضد قارچی قوی تری داشتند. سویه های توانمند برای تایید توان تولید آنتی بیوتیک در فلاسک های حاوی محیط کشت مایع (ISP2 broth) کشت داده شدند. پس از جداسازی بیوماس، ml 200 از مایع رویی با اتیل استات استخراج و در دما و فشار کم به کمک اواپوراتور تغلیظ شد. فعالیت آنتی بیوتیکی دیسک های کاغذی حاوی عصاره خشک شده با روش انتشار در آگار ارزیابی شد. 4 سویه برتر HG443, HG442, HG116 و HG87 با قطر هاله عدم رشد ? mm20 (به دست آمده به ترتیب از نمونه خاک های مشهد و تبریز)، برای مطالعات بیشتر و بررسی اثر سمیت سلولی انتخاب شدند. هیچیک اثر سمیت بر روی دودمان سلولی HEK (Human Embryonic Kidney cells) نداشتند. سویه HG116 اثر آنتی توموری بر روی سلولهای T47D نیز داشت. آنالیزترادف ژن 16S rRNA جدایه HG116، 100% شباهت به گونه های S. griseoincarnatus S. variabilis , S. labedae,و S. erythrogriseus وجدایه HG87، شباهت %92/99 به S. xinghaiensis نشان داد. این سویه ها به ترتیب Streptomyces sp. UTMC01390 وStreptomyces sp. UTMC01392 نامگذاری شدند. دو سویه برتر دیگر HG442 وHG443 بودند که هر دو شباهت 100% به S. toxytricini و S. globosus نشان دادند. این دو سویه از یکدیگر در برخی ویژگی های فنوتیپی متفاوت بودند. جدایه HG442 دارای اثر سمیت بر سلولهای بنیادی بود. این سویه ها به ترتیب Streptomyces sp. UTMC01389 و Streptomyces sp. UTMC01397 نامیده شدند. تمامی جدایه های برتر در بعضی فعالیتهای آنزیمی و الگوی مصرف منابع کربنی از گونه های منسوب متفاوت بودند. نتایج به دست آمده می تواند نشان دهنده تولید متابولیتهای ثانوی وسیع الطیف در اکتینومایست های خاک های ایران باشد.
- Abstract
- Abstract Potential of Iranian soils was screened for the presence of antibiotic-producing actinomycetes against Salmonella enterica ssp. enterica ser. Typhi. From 37 soil samples cultured, 522 isolates were screened for their potential to produce antibiotics against S. typhi by well-agar diffusion method. 9 potent strains were obtained, All exhibited broad spectrum anti-bacterial activity; two of which (HG442 and HG443) showed strong antifungal activity. The potent strains were grown in flasks containing liquid culture (ISP2broth) for evaluation and confirmation of antibiotic production. After biomass separation, 200 ml of the supernatant was extracted with ethyl acetate and concentrated under low pressure and temperature using rotary evaporator. The extract was dried on paper disks and its antibiotic activity was evaluated by agar diffusion method. Four selected strains HG116, HG442, HG443 and HG87 with inhibition zone diameter ?20mm (obtained from Mashhad and Tabriz soil samples, respectively) were selected for further studies and evaluation of cytotoxic effect on human cells. None exhibited cytotoxicity on HEK (Human Embryonic Kidney) cell lines; HG116 had anti-tumor activity on T47D cells. 16S rRNA gene sequencing analysis revealed that isolate HG116 had 100% similarity to S. griseoincarnatus, S. labedae, S. variabilis and S. erythrogriseus and Isolate HG87 had 99.92% similarity to S. xinghaiensis. These strains designated as Streptomyces sp. UTMC01390 and Streptomyces sp. UTMC01392, respectively. The other two selected strains, HG442 and HG443 revealed 100% similarity to Streptomyces toxytricini and Streptomyces globosus. The two strains differed in some phenotypic properties from each other. Isolate HG442 inhibited the growth of USSC cell lines. They were designated as Streptomyces sp. UTMC01389 and Streptomyces sp. UTMC01397, respectively. The selected strains could be distinguished from related species by some phenotypic properties including enzymatic activities and carbon source utilization patterns. Our results demonstrate the broad range activity exhibited by secondary metabolites of the soil actinomycetes of Iran.
