عنوان پایان‌نامه
مطالعه بر همکنش IGg انسانی و نانو لوله های آمین دار اصلاح شده با آنتی IGg به روش الکتروشیمی
- رشته تحصیلی
- بیوفیزیک
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 10870;کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 10870ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 47917
- تاریخ دفاع
- ۲۷ مهر ۱۳۸۹
- دانشجو
- علیرضا لطف ابادی
- استاد راهنما
- هدایت اله قورچیان
- چکیده
- تشخیص زود هنگام بسیاری از بیماری ها کمک زیادی به درمان آن ها می کند. لذا اگر یک بیماری در مراحل اولیه تشخیص داده شود حتی ممکن است بتوان آن را به طور کامل درمان نمود. استفاده از ایمونوحسگر ها به دلیل حد تشخیص پایین آن امروزه کاربرد وسیعی در تشخیص بیماری ها پیدا کرده است. نحوه تثبیت آنتی بادی در طراحی ایمونوحسگر نقش بسیار مهمی را دارا می باشد. به این نحو که تا حد امکان باید سعی شود آنتی بادی بهترین جهت یابی را برای اتصال به آنتی ژن، به خود بگیرد. نکته قابل توجه دیگر در این طراحی نوع سیستم آشکار ساز به کار گرفته شده می باشد. روش آشکار سازی الکتروشیمیایی به دلیل دارا بودن مزایایی نظیر سادگی، ارزانی و حد تشخیص پایین یکی از کاندیدا های مطلوب در این راستا می باشد. در این تحقیق یکی از بهترین روش های تثبیت به کار گرفته و همچنین تکنیک ساده و ارزان الکتروشیمی به عنوان سیستم آشکار ساز انتخاب شد. و همچنین از نانولوله های کربنی به عنوان حامل استفاده شد. دلایل عمده استفاده از نانولوله های کربنی، رسانایی الکتریکی بالای آن و همچنین افزایش سطح مورد نیاز برای تثبیت آنتی بادی می باشد. روش کار به این صورت است که در ابتدا نانولوله های کربنی به وسیله گروه های کربوکسیل و سپس گروه های آمین عامل دار شد در ادامه آنتی بادی در ناحیه Fc، به کمک یک اکسید کننده ملایم نظیر سدیم پر یدات اکسید گردید و در نتیجه گروه های هیدروکسیل قندهای موجود بر روی ناحیه Fc آنتی بادی به گروه های آلدهیدی تبدیل شد. در ادامه کار پس از مجاورت نانولوله های کربنی آمین دار با آنتی بادی، آنتی بادی با جهت یافتگی بالا و به صورت کووالان بر روی نانولوله های کربنی تثبیت گردید. پس از عامل دار کردن نانولوله های کربنی و تثبیت آنتی بادی بر روی آن، جهت اطمینان و تایید روش تثبیت از تکنیک های میکروسکوپ الکترونی روبشی نشر میدانی (FESEM)، FTIR، اسپکتروسکوپی UV-Vis و الکتروشیمی کمک گرفتیم. در مراحل بعدی سنجش غلظت آنتی ژن (HIgG) به کمک روش ولتامتری چرخه ای انجام شد. حد تشخیص در این روش برابر با 6/16 نانو گرم در میلی لیتر تعیین شد.
- Abstract
- In many cases, the early diagnosis of diseases plays a critical role in their treatment. Hence, if a disease be diagnosed early, it may be treated completely. Because immunosensor have low detection limit, nowadays they are used in the diagnosis of diseases now widely. The method of immobilization of antibodies plays very important role in the Immunosensor design. This way should be possible try to be the best antibody orientation for bond to the antigen. Another notable topic in this design is the type of detection system has been used. Electrochemical detection method due to advantages such as simplicity, cheapness and low detection limit is a desirable candidate. In this study, the simple and inexpensive technique of electrochemistry was used as detection system. Also, carbon nanotubes were used as carriers. The high electrical conductivity and large surface are the main characteristics of carbon nanotubes, to be used as base for antibody immobilization. In this method, at first, carbon nanotubes were functionalized by carboxyl groups and followed by functionalizing with amine groups. Then the Fc area of antibody was oxidized by sodium periodate as an oxidizing compound which leads to conversion of sugar's hydroxyl groups on the Fc area of antibody to aldehyde groups. Finally, after intimate connection of NH2-carbon nanotubes to antibody, the oriented antibody covalently is immobilized on carbon nanotubes. After functionalization of carbon nanotubes and immobilization of antibody on it, to verification and ensure immobilization, the techniques such as field emission Scanning Electron Microscope (FESEM), FTIR, UV-Vis spectroscopy and electrochemistry were used. In the next step, determination of antigen (HIgG) concentrations were performed using cyclic voltammetry. In this method a detection limit of 16.6 ng/ml was obtained.
