عنوان پایان‌نامه
بررسی بازدارندگی گاج بر بیان و عملکرد پروتئین بی کاتینین در سلول های اس دایبیو ۴۸۰
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم‌سلولی‌مولکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 4406;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 47293
- تاریخ دفاع
- ۰۳ مهر ۱۳۸۹
- دانشجو
- لیلی کشکولی
- استاد راهنما
- سیدمحمود عرب نجفی
- چکیده
- مسیر پیام رسانی wnt/?-catenin نقش مهمی را در تکامل جنینی ایفا می کند. اختلال در این مسیر در برخی بیماریها مانند سرطان ها دیده شده است. بیش از 90 درصد سرطان های کولون دارای حداقل یک جهش در یکی از اجزای این مسیر پیام رسانی می باشند. جهش در اجزای این مسیر منجر به افزایش پروتئین?-catenin در سیتوپلاسم و هسته سلول ها می شود. افزایش پروتئین ?-catenin در هسته، بیان یک سری از ژن های هدف این پروتئین را به دنبال دارد. بنابراین کنترل بیان و عملکرد پروتئین ?-catenin می تواند هدف مناسبی در مطالعات بیولوژیکی باشد. در مسیر پیام رسانی wnt/?-catenin، لیگاند های wnt از طریق گیرنده هایFrizzled پیام را به داخل سلول انتقال می دهند. این گیرنده ها از نظر ساختمانی شبیه به گیرنده های جفت شونده با G-پروتئین ها می باشند. بنابراین نقش G-پروتئین ها در کنترل مسیر پیام رسانی wnt/?-catenin مورد مطالعه قرار گرفته است. مطالعات قبلی ما بر روی سلول های HEK293T نشان داده است که فعال شدن زیرواحد G?q که از خانواده G-پروتئین ها می باشد، موجب پایدار شدن ?-catenin در سلول می شود. از طرفی این عملکرد توسط بیان مینی ژن بازدارنده G?q ( کد کننده انتهای کربوکسیل پروتئین G?q ) مهار می شود. بنابراین در این مطالعه از یکی از رده های سلولی سرطان کولون به نام SW480 استفاده شد. این سلول ها دارای مقادیر زیادی از پروتئین ?-cateninدر سیتوپلاسم و هسته خود می باشند. در این مطالعه، سلول های SW480 با پلاسمید حاوی مینی ژن بازدارنده G?q به صورت گذرا ترانسفکت شدند هم چنین مینی ژن بازدارنده G?s به عنوان کنترل این آزمایشات مورد استفاده قرار گرفت. سپس با کمک روش های وسترن بلاتینگ و ایمونوفلورسانس مقدار پروتئین ? -cateninدر این سلول ها در هنگام بیان و عدم بیان مینی ژن بازدارنده G?q، مورد بررسی قرار گرفت. هم چنین عملکرد پروتئین ? -catenin برژن های هدف با کمک روش RT-PCRبررسی شد. نتایج ما نشان داد که با وجود کاهش اندک پروتئین ? -catenin در سلول به دنبال بیان مینی ژن بازدارنده G?q، مهار کامل ژن های هدف پروتئین ? –catenin مانندFGF20, C-myc, CyclinD1 انجام می شود. از طرفی در برخی نتایج این بازدارندگی توسط پپتید بازدارنده G?s نیز مشاهده شد. به نظر می رسد که این مینی ژن قادر به کنترل پروتئین ? –catenin و عملکرد آن از طریق مسیر های دیگر ملکولی می باشد.
- Abstract
- Wnt/?-catenin signaling is one of the most important pathways that controls embryonic development. Deregulation of this pathway is a major factor during human carcinogenesis. More than 90 % of all colorectal cancers have a mutation in one of the components of the canonical wnt signaling pathway, leading to cellular and nuclear accumulation of the ?-catenin protein and expression of very important genes which contribute to carcinogenesis. Therefore controlling ?-catenin expression and function might be interesting targets for clinical studies. In the wnt signaling pathway, Wnt ligands send signals through the Frizzled receptors which have structural similarity to G-protein receptors (GPCRs). Therefore a question has been raised whether G-proteins regulate Wnt signaling. Our previous experiments in HEK293T cells have shown that activation of the G?q class of G-proteins stabilizes ?-catenin protein. The G?q-mediated stabilization of ?-catenin was blocked by expression of a minigene encoding the G?q blocking peptide. As a different cell system in this study we used SW480 colon cancer cells which intrinsically have high levels of cytoplasmic ?-catenin protein. SW480 cells were transfected with plasmids encoding G?q inhibitory peptide. A minigene encoding the G?s inhibitory peptide was used as a control. ? -catenin expression examined in these cells in the presence and absence of the G?q inhibitory peptide by immunofluorescence and western blotting technique. We also studied the effect of G?q inhibitory peptide on ?- catenin function by RT- PCR technique. Our result showed that although inhibition of G?q doesn’t significantly affect ?-catenin levels, expression of the G?q minigene dramatically blocks expression of target genes, such as FGF20, c-myc, cyline D1. However in some experiments we observed these result in the presense of blocking peptide against G?s minigene. We concluded that may be ?-catenin target genes expressions are controlled by others signaling pathways which G-proteins play role in them.
