عنوان پایان‌نامه
برسی آنزیم بتا ۱و۳ گلوکاناز خارج سلولی در برخی جدایه های
- رشته تحصیلی
- مهندسی‌کشاورزی-بیماری‌شناسی‌گیاهی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 44519;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 352
- تاریخ دفاع
- ۱۸ اسفند ۱۳۸۸
- دانشجو
- فاطمه زواری
- استاد راهنما
- نوازاله صاحبانی
- چکیده
- چکیده در این تحقیق 13 جدایه مختلف تریکودرما، متعلق به سه گونه¬ی متفاوت از این جنس به عنوان عوامل بیوکنترل بیماری بوته میری خیار (Phytophthora drechsleri) مورد آزمایش قرار گرفتند و نتیجه این کنترل کنندگی با میزان فعالیت آنزیمی بتا 1و3 گلوکانازی جدایه¬های تریکودرما مقایسه شد. برای بررسی فعالیت آنتاگونیستی جدایه¬های فوق آزمایش¬های مختلفی به کمک آزمون تولید مواد فرار و روش متقابل انجام گرفت. در آزمون تولید متابولیت¬های فرار (گازی) جدایه¬های تریکودرما در جلوگیری از رشد میسیلیوم قارچ عامل بیماری مؤثر بودند. ترکیبات فرار جدایه T. harzianum T39 با 10/59 درصد بازدارندگی و پس از آن جدایه T. virens 401.4 با 24/58 درصد بازدارندگی بیشترین اثر را در جلوگیری از رشد عامل بیماری داشتند. در آزمون کشت متقابل(dual culture) مشاهده شد که جدایه¬های تریکودرما در رقابت تغذیه¬ای نسبت به P.drechsleri موفق بودند. همچنین تمامی جدایه¬ها به جز جدایه¬های T. virens 414، T. harzianum TNO ، T.virens TB و T.virens 304 توانایی رشد روی میسیلیوم¬های P. drechsleri را دارا بودند. بیشترین درصد بازدارندگی از رشد به میزان 60/32 درصد در تقابل جدایه T. virens ME/B با عامل بیماری مشاهده شد. میزان رشد پرگنه¬ای جدایه¬های فوق در محیط کشت آب آگارحاوی کربوکسی متیل سلولز(CMC) نیز مورد ارزیابی قرار گرفت و مشاهده شد که بین میزان رشد پرگنه¬ای جدایه¬ها و میزان فعالیت بتا1و3 گلوکانازی مترشحه از آن¬ها ارتباط مستقیمی وجود دارد. همچنین میزان رشد پرگنه¬ای این جدایه¬ها در دماهای5، 15، 20، 25، 30 و 40 درجه سانتیگراد و نیز در محیط کشت جامد با pHهای مختلف (3، 5، 7، 8 و 9) مورد ارزیابی قرار گرفت. در آزمون رشد جدایه¬های تریکودرما در pH های مختلف مشاهده شد که جدایه ¬های تریکودرما در طیف وسیعی از pHها رشد کردند و 5pH به عنوان مناسبترین pH برای رشد جدایه¬ها در نظر گرفته شد و جدایه¬های T. virens ME/B و Trichoderma sp. متحمل به تغیرات pHمحیط بودند. در آزمون رشد جدایه¬های تریکودرما در دماهای مختلف، دمای25 درجه سانتی¬گراد به عنوان دمای بهینه برای تمامی جدایه¬های مورد آزمون معرفی شد. همچنین این جدایه¬ها از نظر میزان فعالیت بتا1و3 گلوکانازی مورد ارزیابی قرار گرفتند. ابتدا همه¬ی این جدایه¬ها در محیط کشت حاوی CMC کشت داده شده و از نظر میزان فعالیت آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز مقایسه شدند. در این آزمایش جدایه T. harzianum T39 و T. virens 304 با بیشترین فعالیت بتا 1و3 گلوکانازی در مقام اول قرار گرفتند . در مرحله بعدی 7 جدایه¬ای که در آزمایش اول فعالیت آنزیمی بیشتری نسبت به سایر جدایه¬ها داشتند جهت بررسی فعالیت آنزیم بتا 1و3 گلوکاناز در محیط کشت حاوی دیواره سلولی Pythium sp. انتخاب شدند و جدایه T. harzianum T39 بیشترین فعالیت بتا1و3 گلوکانازی را داشت که در آزمون اولی هم در زمره جدایه¬های برتر بود. در بخش آزمایشات گلخانه¬ای جدایه ¬های T. harzianum T39 با37 درصد کنترل کنندگی، جدایه T. viride 304.11 با 60/31 درصد کنترل کنندگی، جدایه T. virens 414.8 با 30 درصد کنترل کنندگی و جدایه T.virens 304 با 67/29 درصد کنترل کنندگی بیشترین تأثیر را در کنترل P. drechsleri نسبت به سایر جدایه¬ها داشتند همچنین وزن تر و خشک اندام هوایی و ارتفاع گیاهچه¬ها مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج همبستگی شاخص¬های اندازه¬گیری شده در گلخانه مثبت بود. همچنین بین این شاخص¬ها و میزان فعالیت بتا 1و3 گلوکانازی رابطه مستقیمی مشاهده شد. بطور کلی نتایج حاصل از این تحقیق نشان می¬دهد که جدایه T. harzianum T39 در تمامی آزمون¬ها به عنوان جدایه¬ی¬ موفق مطرح بوده است. کلمات کلیدی: کنترل بیولوژیک، Trichoderma spp.، Phytophthora drechsleri، ?-1,3 glucanase activity
- Abstract
- In this study, 13 isolates of Trichoderma belonging to 3 species of this genus were screened for ?- 1,3 glucanase activity and biological potential to control of cucumber root rot (Phytophthora drechsleri) in labrotory and greenhouse condition. All antagonist isolates inhibited mycelia growth of the pathogen in dual culture and through production of volatile. T.virens ME/B reduced the mycelia growth of pathogen significantly by 32.60 %. T. harzianum T39 and T. virens 401.4 were after that. The pH and temperature effects on Trichoderma mycelia growth were also evaluated. Trichoderma strains grew under a wider range of pH. T.virens ME/B and Trichoderma sp. Were sufferer to pH variation and thermophile. These isolates were cultured in liquid culture medium containing carboxy methyle cellulose (CMC) as sole carbon source for ?- 1,3 glucanase induction and then the ?-1,3 glucanase activity of each isolate was evaluated. According to results, T. harzianum T39 showed maximum rate of enzyme activity and T. virens ME/B isolate showed minimum rate. In the other experiment, 7 isolates mentioned in previous experiment wich had maximum rate of enzyme activity were cultured in liquid culture medium containing Pythium cell wall as sole carbon source and ?-1,3 glucanase activity was evaluated for each isolate. According to results, T. harzianum T39 showed maximum rate of enzyme activity. The effect of Trichoderma isolates on biocontrol of cucumber root rot were investigated in greenhouse condition and T. harzianum T39 was the best isolate. The result also showed a direct correlation between ?-1,3 glucanase secretion and inhibition growth of phytophthora drechsleri mycelium.
