عنوان پایان‌نامه
تشدید بیان زن آ ت در گیاه آرابیدوبسس
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی-اصلاح نباتات
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 4100;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 438;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 46373
- تاریخ دفاع
- ۱۴ آذر ۱۳۸۹
- دانشجو
- سارا شاه نجات بوشهری
- استاد راهنما
- هوشنگ علیزاده, علیرضا عباسی
- چکیده
- ریشه¬های موئین، نقش مهمی را در جذب آب و مواد غذایی از خاک بازی می¬کنند و به عنوان جایگاهی برای اثـر متقابل با میکرواگانیسم¬های خاک محسوب می¬شوند. فرایند شکل¬گیری ریشه¬های موئین در Arabidopsis thaliana شناخته شده می¬باشد. پیشنهاد شده است، که وقایع طویل شدن و بلوغ که در ریشه اتفاق می¬افتـد، توسط قابلیت بسط دیواره سلـولی و فشار اتـساع غشای پروتوپلاسم گیاهی کنترل می¬شود. Expansinها اساساً به عنوان عامل اصلی برای سست کـردن و بسـط دیواره سلـولی محسـوب می¬شوند. این پروتئین¬ها توسط یک خانواده بزرگ ژنی، متشکل از چهار زیرخانواده کد می-شوند که همـگی از یک جد مشترک نشـأت گرفتـه¬اند و شامل -expansin? (EXPA)، ?-expansin (EXPB)، expansin-like A (EXLA) و expansin-like B می¬باشند. ثابت شده است که بیان یک ژن اختصاصی ریشه به نام AtEXPA18 به طور مستقیم با تشکیل ریشه¬های موئین مرتبط است. در این تحقیق، ژن AtEXPA18 توسط آنزیم high fidelity و پرایمرهای حاوی سایت¬های برشی BamHI و SacI تکثیر شد و سپس به داخل وکتور pGEMT کلون شد. برای ساخت سازه ژنی نهایی، هضم دوگانه pGEMT نوترکیب با ژن AtEXPA18 و ناقل pBI121 انجام شد. و در نهایت قطعه AtEXPA18 به درون ناقل بیان گیاهی pBI121 منتقل شد و تحت کنترل پروموتر CaMV35S و خاتمه دهنده NOS قرار گرفت. سپس این سازه به Agrobacterium tumefaciens و متعاقباً با روش غوطه¬وری گل آذین به آرابیدوپسیس منتقل شد. گیاهان تراریخت آرابیدوپسیس روی محیط انتخابی حاوی کانامایسین گزینش و توسط آزمون RT-PCR و پرایمرهای اختصاصی ژن nptII و AtEXPA18 تأیید شدند.
- Abstract
- Root hairs play a role in the uptake of water and nutrients from the rhizosphere and serve as a site of interaction with soil microorganisms. The process of root hair formation is well characterized in Arabidopsis (Arabidopsis thaliana). The events of cell elongation and maturation occurring in the root have been suggested to be controlled by the extensibility of the cell wall and the turgor pressure inside the cell. Expansins are mainly considered as a primary agent for cell wall loosening and extension. These proteins are encoded by a superfamily of genes that are organized into four families on a phylogenetic tree ?-expansin (EXPA), ?-expansin (EXPB), expansin-like A (EXLA) and expansin-like B (EXLB). It has been demonstrated the expression of a root-specific Arabidopsis expansin gene (AtEXP18) is tightly linked to root hair initiation. In this study, Full length AtEXPA18 was amplified using High fidelity and primers having SacI and BamHI overhangs. Then it was cloned into pGEMT vector. To make the final construct, both recombinant pGEMT carrying AtEXPA18 and pBI121 were digested with restriction enzymes and finally the AtEXPA18 fragment was inserted into the binary plant expression vector pBI121 under the control of a constitutive promoter, Cauliflower mosaic virus 35S (CaMV35S) and a terminator, NOS (nopaline synthase gene). This construct was then transferred into Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404 and subsequently transformed into Arabidopsis thaliana via Floral dip method. Transformed Arabidopsis plants were selected on selective medium containing Kanamycin, and were confirmed with RT-PCR using Neomycin Phosphotransferase (nptII) and AtEXPA18 primers. Key words: Agrobacterium Tumefaciens, Arabidopsis thaliana, cell wall loosening, Expansin , floral dip
