عنوان پایان‌نامه
تعیین توالی نوکلییدی کاتپسین L در کنه ری پی سفالوس (بوافیلوس ) آنولاتوس
- رشته تحصیلی
- انگل شناسی دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 31 ارشد;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 31 ارشد;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 61394
- تاریخ دفاع
- ۱۶ دی ۱۳۹۲
- دانشجو
- شهین صیدی
- استاد راهنما
- صدیقه نبیان
- چکیده
- کنه‌ها انگل‌های خارجی مهم دام‌ها می‌باشند که در سراسر جهان از دو طریق مستقیم( با ایجاد کم‌خونی، کاهش وزن، فلجی وضایعات مکانیکی) و غیر مستقیم( انتقال اجرام بیماریزا) زیان‌های اقتصادی شدید ایجاد می‌نمایند. کنه ریپیسفالوس(بوافیلوس) آنولاتوس یکی از مهمترین انگل‌های خارجی است که سبب انتقال تک یاخته‌های بابزیا بایژمینا، بابزیا بویس و آناپلاسما مارژیناله به گاو می‌شود. امروزه از روش‌های مختلفی به‌منظور مبارزه با کنه‌ها و بیماری های منتتقله توسط آنها استفاده می‌گردد اما هنوز رایج‌ترین روش، استفاده از ترکیبات شیمیایی است اما با توجه به اشاعه مقاومت کنه‌ها نسبت به این ترکیبات و آلودگی‌های زیست محیطی، توجهات خاصی معطوف به یافتن روش‌های جدید غیر شیمیایی گردیده است. آنالیز پروتئومی و ژنتیکی کنه‌ها می‌تواند راه حل مناسبی در جهت دستیابی به استراتژی‌های جدید کنترلی باشند. سیستئین پروتئازها از جمله ترکیباتی هستند که در اعمال فیزیولوژیکی کنه‌ها در ارتباط با رشد و پدیده‌های هموستازی نقش مهمی را عهده دارند بیشتر این پروتئازها متعلق به فوق خانواده سیستئین پروتئازها می‌باشند. هدف از مطالعه حاضر، تعیین و شناسایی ژن کدکننده کاتپسین L، کنه ریپیسفالوس(بوافیلوس) آنولاتوس در ایران می باشد. به این منظور در ابتدا اقدام به جمع آوری کنه های خون خورده بوافیلوس آلولاتوس از دو منطقه گیلان و مازندران شناسایی آنها با استفاده از کلید تشخیص معتبر گردید. سپس این کنه‌ها در شرائط ویژه دمای 28 درجه و رطوبت 85% در آزمایشگاه کشت داده شدند و نوزادهای آنها جهت خونخواری و تکمیل چرخه زندگی روی گوساله برده شدند. نوزادهای 21 روزه تا زمان آزمایش در دمای -70 درجه سانتی‌گراد نگهداری شدند. جهت دستیابی به توالی ژن کد کننده کاتپسین L، مراحل مختلف شامل استخراج RNA، ساخت cDNA، انجام واکنش نسخ برداری معکوس(RT-PCR)، و کلون نمودن در پلاسمید pTZ57R/T انجام پذیرفت و سپس محصول نهایی تعیین ترادف گردید. نتیجه تعیین توالی کامل ژن کاتپسین 999 جفت باز بود که پس از ترجمه آن توسط نرم افزار .Expasy
- Abstract
- Ticks are important ectoparasites which can cause massive losses in livestock production worldwide due to direct damages such as blood loss, weight loss, tick paresis, tick worry and mechanical damages, or indirect damages such as pathogen transmission . The tick Rhipicephalus ( Boophilus) annulatus is one of the most important bovine ectoparasites, which can transmit the protozoans Babesia bigemina , Babesia bovis and Anaplasma marginale to cattle. In the present, the different methods are using for controlling ticks and tick-borne diseases. Currently the principal measure is application of acaricidal chemicals, but due to developing of resistant strains of ticks and environmental pollution, new approaches to tick control are needed. Many of the investigators are involving for finding an efficient and non- chemical tick control program. Proteome and genetic analysis of ticks will provide a resource that could be helpful for finding biologically important molecules to develop novel control strategies. Cysteine proteases are involved in different physiological procedures associated with the development and tissue homeostasis of hemophagus ticks. Most of these proteases belong to the papain- like superfamily of cysteine proteases. The aim of the present study was identification and characterization of gene encoding cathepsin L from Rhipicephalus ( Boophilus) annulatus in Iran. In this purpose at first, the ticks collected from two regions Mazandaran and guilan. They were identified using key characters and cultivated in the Laboratory at 28C and 85% relative humidity and their parasitic life cycle was completed in calves. Twenty and one day old larvae were collected after egg hatching and kept at -70 C until used. In order to identify Gene encoding cathepsin, the different steps including: RNA extraction, cDNA synthesis, RT- PCR and cloning in PTZ57/T plasmid were achieved and the final product was sequenced. An approximately 999 bp long PCR product was obtained as complete length. The protein cathepsin L like of Boophilus annulatus from two different geoghraphical region had 100% homology. Boophilus annulatus cathepsin L like protein was directed to Uniprot and similarity with other records were evaluated. These comparison Revealed that the most similarity were related to cathpsin L like of Rh(B) micropolus from india ( AFQ98385.1) and Brazil ( AAF61565.1 ). It seems that this protein could be a candidate for chemotherapy and prevention program that should be examined.
