عنوان پایان‌نامه
بلوغ آزمایشگاهی فولیکول های بدوی گوسفند
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم جانوری - تکوینی جانوری
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5268;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 62216
- تاریخ دفاع
- ۰۲ بهمن ۱۳۹۲
- دانشجو
- سمانه صادق نیا
- استاد راهنما
- قمرتاج حسین
- چکیده
- یکی از روش‌های حفظ باروری، کشت فولیکول در شرایط آزمایشگاهی به منظور دستیابی به تخمک بالغ می‌باشد. با توجه به وجود شباهت‌های ساختاری و فیزیولوژیک بین تخمدان گوسفند و انسان و نیز محدودیت‌های اخلاقی در پژوهش بر تخمدان انسان، از گوسفند به عنوان یکی از مدل‌های انسانی بدین منظور استفاده می‌گردد. هدف از انجام این مطالعه بررسی روش‌های مختلف جداسازی و کشت فولیکول‌های بدوی گوسفند می‌باشد. پس از جمع‌آوری تخمدان‌های گوسفندی از کشتارگاه، قشر تخمدان از مدولا جدا گردیده و با استفاده از اسکالپل به قطعات mm3 3أ3أ1 تقسیم شد. بدین منظور قطعات قشر تخمدانی به چهار گروه تقسیم گردیدند: 1- قطعات تخمدان در غلظت‌های مختلف ژل آلژینات کشت داده شدند، 2- فولیکول‌های جداشده از قشر تخمدان، در غلظت‌های مختلف ژل آلژینات کشت داده شدند، 3-قطعات قشر تخمدان، ابتدا منجمد شده و پس از یخ‌گشایی کشت داده شدند و 4- فولیکول‌های جداشده از قشر تخمدان، ابتدا در داخل ژل آلژینات منجمد شده و پس از یخ گشایی کشت داده شدند. در تمام گروه‌ها، شاخص‌های کمی و کیفی مانند افزایش تعداد و اندازه فولیکول‌ها، درصد زنده مانی و یافته‌های بافت شناسی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج آزمایش اول افزایش معنی‌دار تعداد فولیکول‌های ثانویه در قطعات بافتی قشر تخمدان که داخل ژل آلژینات قرار نگرفته بودند، را نشان داد (p=0.005 ) در آزمایش دوم، افزایش اندازه فولیکول‌ها در گروهی که داخل آلژینات %2 قرارگرفته بودند، به طور معنی‌دار بیشتر از سایر گروه‌ها بود (p=0.003). نتایج آزمایش سوم، حاکی از عدم وجود تأثیر معنی دار فرآیند انجماد بر میزان زنده ماندن و رشد فولیکول‌های منجمد شده در قطعات بافتی قشر تخمدان بود (p=0.89 ) در آزمایش چهارم، در صد زنده ماندن فولیکول‌های جداشده که در آلژینات محصور و سپس منجمد شد بودند، به طور معنی‌داری کمتر از فولیکول‌های منجمد نشده بود (p=0.014) با توجه به نتایج حاصل از مطالعه حاضر، به نظر می‌رسد قرار دادن قطعات بافتی قشر تخمدان گوسفند در غلظت‌های مختلف ژل آلژینات، تأثیر معنی‌داری در رشد فولیکول‌های تخمدانی ندارد. همچنین تراکم بیشتر محیط کشت، موجب رشد بهتر فولیکول‌های بدوی می گردد. علاوه بر این به نظر می‌رسد قطعات بافت تخمدان فرآیند انجماد را بهتر از فولیکول‌های جداشده، تحمل می‌نمایند
- Abstract
- In vitro follicle growth is a promising fertility preservation strategy in which ovarian follicles are cultured to produce mature and fertilization-competent oocytes. Due to morphological and physiological similarities between human and sheep ovaries and the ethical constrains of working with human ovaries. This study was designed to compare the different methods of primordial follicle isolation in sheep ovaries. The sheep ovaries were obtained from slaughterhouse. The ovarian cortex was dissected from the medulla and sliced into 3×3×1 mm3 pieces using a scalpel blade. For follicular isolation, the ovarian fragments were allocated into 4 groups: 1) ovarian cortex pieces were dissected and cultured in different alginate concentrations. 2) Isolated primordial follicles were cultured in different alginate concentrations. 3) Ovarian cortex pieces were vitrified and cultured after thawing. 4) Isolated primordial follicles were vitrified after they were embedded in alginate, and cultured after thawing. Some quantitative and qualitative indicators of follicles, such as increase in size, percent of viability percentage and histological findings were evaluated. Our results showed that in the first group there was a significant increase in secondary follicles numbers in the ovarian cortex pieces regardless of alginate (p=0.005). In second experiment, there was a significant increase in size of follicles which embedded in 2% alginate compared to other groups (p=0.003). In third experiment, there was no significant difference in follicles' diameter and percent of viability in vitrified ovarian pieces and non vitrified ones (p=0.89). In fourth experiment, the percentage of live follicles which were embedded in alginate and then they were vitrified was significantly lower than the fresh ones embedded in alginate (p=0.014). Taken together, the present study showed that embedding the ovarian cortex pieces in the different alginate concentrations did not have any significant effects on the follicle’s size. Furthermore, it seems that higher concentration of alginate induced the better growth of primordial follicles. Moreover it seems that, the ovarian cortex pieces can tolerate vitrification process better than the isolated follicles
