عنوان پایان‌نامه
بررسی ساز و کار تشکیل توده پروتئین دارویی رتپلیز با استفاده از مدل اتلاف مونومر
- رشته تحصیلی
- مهندسی شیمی-داروسازی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس یک فنی شماره ثبت: 1653.;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 70947
- تاریخ دفاع
- ۲۴ دی ۱۳۹۳
- دانشجو
- سهیلا ارشادی فارسانی
- چکیده
- تشکیل توده در پروتئین¬های دارویی باعث کاهش بازده و افزایش هزینه¬های تولید می¬شود. همچنین می¬تواند باعث کاهش اثربخشی دارو و یا ایجاد عوارض جانبی در بدن بیمار شود. بررسی چگونگی ایجاد آنها برای یافتن عوامل پیش¬گیری کننده از تشکیل آنها نقش مهمی دارد. این مطالعه به شناخت سازوکار تشکیل توده در پروتئین رتپلیز با استفاده از تحریک دمایی اختصاص یافت. تشکیل توده توسط روش طیف سنجی ماوراء¬بنفش و مشاهده¬ی عینی بررسی شد. در دماهای 4، 25، 50 و70 درجه سانتی¬گراد، تغییرات غلظت مونومر پروتئین با استفاده از طیف 360و280 اندازه¬گیری شد. در دمای 4 درجه، در مدت یک ماه تغییر محسوسی در غلظت مونومر دیده نشد. با افزایش دما تا 25 درجه فرآیند تشکیل توده به کندی انجام شد؛ ولی در دمای 70 درجه واکنش با سرعت بالایی در کمتر از 2 ساعت صورت پذیرفت. برای بررسی سازوکار تشکیل توده¬ی رتپلیز از سینتیک¬های ارائه شده در مدل افت مونومر استفاده شد. داده¬های تجربی با استفاده از نرم افزار متلب در سه مدل خودکاتالیزوری، شروع آهسته و هسته¬ی پیش تعادلی برازش داده شد. با کمک روش بهینه سازی بهترین برازش¬ها بدست آمد. بهترین برازش برای مدل خودکاتالیزوری ?(R?^2>0.98) بدست آمد. برای دو مدل دیگر برازش با (R^2<0.9) اتفاق افتاد. بهترین برازش برای مدل¬های هسته¬ی پیش تعادلی و شروع آهسته در N=2 بدست آمد. که این می¬تواند نشان¬دهنده¬ی تشکیل هسته¬ با اتصال دو مونومر رتپلیز به یکدیگر باشد. ثابت سرعت¬های واکنش نیز محاسبه شد. نتایج نشان داد که افزایش دما سبب افزایش ثابت سرعت¬های واکنش شد. با تغییر دما از 25 درجه تا 70 درجه سانتی¬گراد، K1 از 11-10×1/0±7/4 به 7-10×2/0± 6/1 و همچنین K2 از 5-10×2/0±04/1 به 3-10×3/0±5/1 تغییر یافت. مرحله¬ی محدود کننده¬ی واکنش مرحله¬ی هسته¬زایی است. K_1
- Abstract
- Aggregation of pharmaceutical proteins reduces the efficiency and increases the cost of production. It can also lead to reduced efficacy of drug or cause side effects on the patient’s body. Investigating how to create them plays an important role to find agents that preventing the aggregation. This study was allocated for understanding the mechanism of formation of the Reteplase protein using thermal stimulation. Aggregatuon was studied by ultraviolet spectrometry, and observation. At 4, 25, 50 and 70 ° C, the concentration of protein monomer was measured by using a spectrum of 360 nm and 280 nm. At 4 ° C, there was no significant change in monomer concentration for a month. By increasing the temperature to 25?C, aggregation process was slow, but at 70 ° C, the reaction was carried out at a rapid rate less than 2 hours. In order to investigate the mechanism of Reteplase aggregation, some kinetics that was presented in of monomer-loss models were used. Experimental data was fitted in three “pre balance core”, “self-catalytic” and “slow start” models using MATLAB. The best fit was obtained using optimization methods. Best fit for self-catalytic model is (R2> 0.98). For other two models (R 2 <0.9) occurred. The best fit for the pre balance core and a slow start model was occurred in n = 2. These results could indicate that the core is formed by connecting two Reteplase monomers together. The reaction rate constants were calculated too. The results showed that increasing the temperature increases the reaction rate constant. With increasing temperature from 25 ?C up to 70?C, both of K1 and K2 increased from 4.7 ±0.1*10-11 K1(min-1) to 1.6±0.2*10-7 K1(min-1) and from 1.04±0.2*10-5 K2(M -1 min-1) to 1.5± 0.3*10-4 K2(M -1 min-1) respectively for autocatalytic model. Limitation step of the reaction is the nucleation. K1
