عنوان پایان‌نامه
غربال گری اکتینومایست های مولد پروتئاز به منظور تولید هیدرویز شده کلزا و بررسی خواص آنتی اکسیدانی در پپتون های حاصل
- رشته تحصیلی
- زیست شناسی علوم میکروبیولوژی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5386
- تاریخ دفاع
- ۳۰ بهمن ۱۳۹۱
- دانشجو
- سمیه اسکینی
- استاد راهنما
- جواد حامدی, مهران حبیبی رضائی
- چکیده
- در این پژوهش تعداد 11 جدایه که قبلا طی یک پروژه غربال‌گری اکتینومایست‌های مولد پروتئاز از خاک‌های ایران جدا و در مرکز پژوهشی کلکسیون میکروارگانیسم‌های دانشگاه تهران نگه‌داری شده‌اند، از نظر میزان تولید این آنزیم به صورت کمی مورد بررسی قرارگرفتند. تولید و خالص‌سازی نسبی پروتئاز از دو جدایه UTMC01492 و UTMC01520 که بالاترین میزان تولید آنزیم را نشان داده بودند، با استفاده از رسوب‌دهی با نمک آمونیوم‌سولفات و دیالیز انجام شد. در مورد هر دو جدایه، بالاترین میزان فعالیت در محلول آنزیمی حاصل از رسوب 80 % اشباع آمونیوم‌سولفات به‌دست آمد که به‌ترتیب برابر با 382 و 572/8 واحد در میلی‌لیتر بود. فعالیت ویژه برای این دو آنزیم به ترتیب برابر با 6204/4 و 4521/8 واحد در میلی‌گرم بود. پروتئین‌های گیاهی دانه‌های کلزا و سویا با رسوب‌دهی ایزوالکتریک استخراج شده و با آنزیم‌های خالص شده نسبی و آنزیم آلکالاز به مدت یک ساعت در دمای 50c و pH هشت هیدرولیز شدند. فعالیت آنتی‌اکسیدانی در پپتون‌های تولید شده با اندازه‌گیری درصد پاک‌سازی رادیکال DPPH بررسی شد. نتایج نشان داد که پپتون کلزا تولیدشده توسط آنزیم جدایه UTMC01492 با درجه هیدرولیز ? / ?? % (RPH-38) و پپتون کلزا تولیدشده توسط آنزیم آلکالاز با درجه هیدرولیز RPH-39) %39/4) بالاترین میزان فعالیت آنتی‌اکسیدانی را دارا هستند. فعالیت مهار رادیکال آزاد وابسته به غلظت پپتون بوده است. غلظت موثر میانه (EC50) یا غلظت آنتی‌اکسیدان لازم برای حذف %50 از رادیکال، برای این دو پپتون به‌ترتیب 0/86 و 1/06 میلی‌گرم در میلی‌لیتر بود. در مورد پروتئین‌ها و پپتون‌های سویا فعالیت آنتی‌اکسیدانی قابل‌ملاحظه‌ای مشاهده نشد. فعالیت آنتی‌اکسیدانی پپتون‌های کلزا احتمالا به ترکیب خاص اسیدهای آمینه آن، محدوده وزن مولکولی پپتیدها و نوع آنزیم‌های مورداستفاده مربوط می‌شود.
- Abstract
- The protease production ability was evaluated quantitatively for 11 actinomycetes from University of Tehran Microorganisms Collection Research Center – that previously had been isolated from soil from Iran in a research for screening of protease- producing actinomycetes. Production and partially purification of protease from UTMC01492 and UTMC01520, the most potent strains, were done using salting out and dialysis. For both strains, the fraction obtained by using 80% saturated ammonium sulfate solution, had the maximum protease activity. The protease activity was 382 and 572.8 unit/ml and the specific protease activity was 6206.4 and 4521.8 unit/mg for ezymes obtained of these strains respectively. Proteins were extarcted from defatted soy and rapeseed meal using isoelectric precipitation and hydrolysated by the partially purified proteases and Alcalase 2.4L for 1 hour at 50oC and pH 8. The antioxidant activity of protein hydrolysates were measured using 1,1-diphenyl-2- pycrylhydrazyl (DPPH) radical-scavenging assay. Results revealed that peptones obtained from rapeseed protein hydrolysis using UTMC01492 protease at DH %38.7 (RPH-38) and rapeseed protein hydrolysate using Alcalase 2.4L at DH %39.4 (RPH-39) showed the strongest antioxidant activities. The radical scavenging effect of these bioactive peptones was in a dose-dependent manner. The EC50 values or amount of antioxidant needed to decrease the radical concentration by50%, for RPH-38 and RPH-39 were 0.86 and 1.06 mg/ml respectively. Soy proteins and peptones didn’t show any considerable antioxidant activities. The high antioxidant activity of rapeseed protein hydrolysates are probably related to the amino acid composition of rapeseed proteins, the molecular weight distribution of peptides as well as the proteases used for hydrolysis
