عنوان پایان‌نامه
غربالکری باکتری های دا=رای اندوسپور تولید کننده آنزیم لاکاز. کلو نینگ وبیان ژن مربوطه
- رشته تحصیلی
- زیست شناسی علوم میکروبیولوژی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 4957;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 57293
- تاریخ دفاع
- ۳۰ بهمن ۱۳۹۱
- استاد راهنما
- خسرو خواجه, محمدعلی آموزگار
- دانشجو
- پروین زمانی
- چکیده
- لاکازها (بنزن‌دیول‌اکسیژن‌اکسیدو‌ردوکتاز EC 1.10.3.2) به دلیل قابلیت اکسیداسیون طیف گسترده-ای از سوبستراها کاربردهای زیادی در صنایع بیوتکنولوژیکی دارند . لاکازها آنزیم‌های چند مسی متعلق به گروه اکسیدازهای آبی‌اند. دی‌فنول‌ها و مواد وابسته را اکسید کرده و اکسیژن مولکولی را به عنوان پذیرنده نهایی الکترون استفاده می‌کنند. در این پژوهش ژن لاکاز از باکتری B. pumilus سویه GAZ23 و B. anthracis سویه QZA2 با پرایمرهای کلونینگ تکثیر شد و سپس محصول PCR در ناقل بیانی (pET21a) کلون شد و به باکتری E .coli سویه BL21(DE3) انتقال یافت و آنالیز توالی انجام گرفت. ژن لاکاز در سویه QZA2 دارای 1656 نوکلئوتید و 551 اسید آمینه است و در سویه GAZ23 دارای 1533 نوکلئوتید است که 510 آمینواسید را کد می¬کند. ژن لاکاز جدا شده از سویه GAZ23 دارای 67% شباهت آمینواسیدی به پروتئین CotA B. subtilis است. درحالی‌که ژن لاکاز جدا شده از سویه QZA2 دارای 16% شباهت به پروتئین CotA B. subtilis است. به منظور به دست آوردن مقادیر بالای پروتئین محلول، بیان تحت شرایط میکروآئروبیک و در دمای پایین انجام گرفت. خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم¬ها با استفاده از سوبسترای معمول لاکاز 2,2?-azino-bis(3-ethylbenzothioazolin-6-sulphonic acid) (ABTS) انجام گرفت. کلمات کلیدی: CotA، لاکاز، مولتی کوپر اکسیداز، B. anthracis، B. pumilus
- Abstract
- Laccase (benzene diol oxygen oxidoreductase: EC 1.10.3.2) have many biotechnological application due to their ability towards a wide range of phenolic compounds. within recent years, researchers have been highly interested in identification and characterization of laccase from bacterial sources. In this study, the laccase gene from B. pumilus strain QZA2 and B. anthracis strain GAZ23 was amplified by cloning primers. PCR products cloned in the expression vector (pET21a) and transferred to BL21 strain of E.coli and sequence analysis carried out. The gene of the GAZ23 has an open reading frame composed of 1533 bases, which encode 510 amino acid residues, and the gene of the QZA2 has an open reading frame composed of 1656 bases, which encode 551 amino acid residues. The laccse gene from GAZ23 shows 67% similarity with CotA from B.subtilis, and the laccase gene from QZA2 shows 16% similarity with CotA from B.subtilis. The expression was performed under microaerobic conditions and decreased temperature in order to obtain high amounts of soluble protein. Biochemical properties were investigated using common laccase substrates, 2,2?-azino-bis(3-ethylbenzothioazolin-6-sulphonic acid) (ABTS). Keywords: CotA, laccase, B.anthracis, B.pumilus, multicopper oxidase
