عنوان پایان‌نامه
اثر سطوح مختلف لیستین سویا در رقیق کننده ی منی بر کیفیت اسپرم قوچ بعد از فرآیند انجماد- ذوب
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 5460;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 61196
- تاریخ دفاع
- ۲۴ بهمن ۱۳۹۱
- دانشجو
- مجتبی اماموردی
- استاد راهنما
- احمد زارع شحنه, مهدی ژندی
- چکیده
- حفظ انجماد منی فرآیند پیچیده¬ای است که باعث تغییرات فرا ساختاری، بیوشیمیایی و عملکردی در بخش¬های مختلف اسپرم می¬گردد. در نتیجه، این تغییرات سبب کاهش کیفیت اسپرم می¬شود. بنابراین هدف از انجام این پژوهش، جلوگیری یا کاهش تغییرات و آسیب¬های انجمادی به اسپرم، با بررسی تاثیر رقیق کننده¬های مختلف منی روی کیفیت اسپرم و استفاده از تست¬های ارزیابی مهم مرتبط با توان باروری اسپرم بود. این مطالعه در دو بخش انجام شد. در آزمایش اول اثر سطوح مختلف لسیتین سویا (5/0، 1، 5/1، 2، 5/2%) و زرده تخم مرغ (20%) و در آزمایش دوم بهترین سطح لسیتین سویای آزمایش اول (5/1%) با زرده تخم مرغ و رقیق کننده تجاری بایوکسل بررسی شد. برای آزمایش¬ها، هفت انزال از چهار قوچ بالغ نژاد زندی در طول فصل تولید مثلی جمع آوری و سپس با هم مخلوط شدند. منی مخلوط شده به قسمت¬های مساوی تقسیم و با رقیق کننده¬های مورد نظر رقیق شد. بعد از سرد سازی، منی رقیق شده در پایوت¬های 25/0 بسته بندی منجمد شد. جنبایی و پارامترهای حرکتی اسپرم، درصد کل اسپرم ناهنجار، یکپارچگی غشای پلاسمایی، وضعیت ظرفیت دار شدن، یکپارچگی آکروزوم و آپوپتوزیس، زنده مانی و فعالیت میتوکندری اسپرم بعد از فرآیند انجماد–ذوب ارزیابی شد. کلیه داده¬ها با استفاده از نرم افزار SAS و رویه¬ GLM آنالیز و نتایج به صورت حداقل میانگین مربعات بیان شد. نتایج آزمایش اول نشان داد که جنبایی کل و پیش رونده (به ترتیب 33/1± 43/54 ? و 96/0± 43/25?) و یکپارچگی غشای اسپرم (38/1±86/48 ?) به طور معنی داری (05/0?P) در رقیق کننده دارای 5/1% لسیتین سویا (5/1L)، بالاتر از سایر رقیق کننده¬ها بود. همچنین درصد اسپرم با آکروزوم سالم در رقیق کننده 5/1L، به طور معنی داری (05/0?P) بالاتر (19/2±35/85 ?) از رقیق کننده-های دارای 5/0 و 5/2 درصد لسیتین سویا و زرده تخم مرغ بود. علاوه براین، درصد اسپرم زنده، با آپوپتوزیس اولیه و با میتوکندری فعال بین رقیق کننده¬های مختلف معنی دار شد (05/0?P. نتایج آزمایش دوم نیز نشان داد که جنبایی پیش رونده و برخی از خصوصیات حرکتی اسپرم به طور معنی داری (05/0?P) در رقیق کننده دارای 5/1 درصد لسیتین سویا (TSL)، بالاتر از رقیق کننده¬ زرده تخم مرغ و بایوکسل بود، اما این دو رقیق کننده تفاوت معنی داری با هم نداشتند. در نتیجه با توجه به انجام ارزیابی¬های دقیق، به نظر می¬رسد که رقیق کننده دارای 5/1% لسیتین سویا در رقیق کننده منی قوچ، می¬تواند عملکرد بهتری داشته باشد. البته، مطالعات بیشتری برای بهبود عملکرد این رقیق کننده، با افزودن آنتی اکسیدان¬ها و ارزیابی کیفیت باروری اسپرم منجمد با استفاده از تلقیح مصنوعی میش، مورد نیاز است.
- Abstract
- Semen cryopreservation is complex process that caused ultra structural, biochemical, and functional changes in various parts of sperm. In result, these changes cussed reduce post-thawed sperm quality. Thus, the purpose of the present research was to prevent or reduce above changes with investigation the influence of different semen extenders on sperm quality after freeze-thawing process and use important assessment of in vitro sperm parameters associate with fertility potential. This research was conducted in two parts. In the first experiment the effect of different levels of soybean lecithin (0.5, 1, 1.5, 2 and 2.5%) and egg yolk and in the second experiment the best level of soybean lecithin of first experiment (1.5%), egg yolk and comericaly Bioxcel extenders investigated. For the experiments, seven ejaculates collected from each 4 Zandi rams in breeding season and then were pooled together. The pooled semen was divided into different equal aliquots and diluted with different extenders. After cooling, the diluted semen was packaged into 0.25 ml straws and frozen in liquid nitrogen vapor and then stored in LN2. Sperm motion characteristics, plasma membrane integrity, capacitation, acrosome and apoptosis status, and mitochondrial function were evaluated after thawing. All the data analyzed using SAS software and GLM procedure and results were expressed as the least square means. Results of first experiment demonstrate that total and progressive motility (54.43±1.33% and 25.43±0.96% respectively) and membrane integrity (48.86±1.38%) were significantly (P<0.05) higher in 1.5% soybean lecithin (L1.5) than other semen extenders. For capacitation status, only the percentage of frozen thawed spermatozoa with B pattern (capacitated) for 2.5% soybean lecithin (L2.5) and egg yolk (EY) extenders were significantly (P<0.05) higher than the other extenders. Also, percentage of spermatozoa with intact acrosome in L1.5 (85.35±2.19%) extender was significantly higher (P<0.05) than L0.5, L2.5 and EY extenders. Moreover, the percentage of live sperm and spermatozoa with early apoptosis and active mitochondriy were significant in between extenders (P<0.05). Also, results of second experiment showed that Total motility and some of motion parameters were significantly (P<0.05) higher in 1.5% soybean lecithin (TSL) than egg yolk (TEY) and Bioxcell extenders, but two extender have notsignificant difference together. In conclusion, 1.5% soybean lecithin extender was better performance than other extenders in most in vitro evaluated sperm parameters. Of course, further studies are needed to improve and modified 1.5% soybean lecithin extender by addition of antioxidants in this extender and assisted fertility quality of frozen sperm by using of ewes artificial insemination.
