عنوان پایان‌نامه
« تهیه پیازهای زعفران عاری از ویروس با استفاده از ترموتراپی و بررسی امکان کشت مریستم»
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی - بیماری شناسی گیاهی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 5028;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 53804
- تاریخ دفاع
- ۰۴ اسفند ۱۳۹۱
- استاد راهنما
- مینا کوهی حبیبی دهکردی
- دانشجو
- سارا سبزه
- چکیده
- گیاه زعفران(Crocus sativus) از تیره Iridaceae یکی از مهمترین ادویه های دنیا محسوب می شود. ایران با تولید 90 % زعفران دنیا رتبه اول را در تولید و صادرات این رستنی ارزشمند دارد. پیشرفت کیفی و کمی در مورد این محصول با ارزش، نیازمند توسعه مطالعات و تحقیقات در مورد عوامل بیماریزا از جمله ویروسهای گیاهی زعفران می باشد. بر اساس تحقیقات اولیه و منتشر نشده در ایران پوتی ویروسی از این گیاه جدا سازی و ACP-ELISA شده است. در این تحقیق جهت شناسایی پوتی ویروس بیمارگر زعفران از آزمون سرلوژیکی استفاده گردید. به منظور بررسی حذف ویروس مذکور از بنه های زعفران آلوده اثر RT-PCR آزمون مولکولی روش های کشت مریستم، گرمادرمانی و کشت مریستم توام با گرمادرمانی مورد ارزیابی قرار گرفت. راندمان ، ACP-ELISA روشهای مذکور در عاری سازی ویروس از بنه های زعفران آلوده با آزمون های مورد ارزیابی قرار گرفت. بر اساس نتایج آزمون های سرلوژیکی، 563 نمونه از 780 نمونه جمع IC-RT-PCR آوری شده آلوده به پوتی ویروس بودند که کلکسیون بنه های استان خراسان رضوی ( کشت شده در محمد 75 بیشترین سهم را در تعداد نمونه های آلوده داراست. در نتیجه آزمون / شهر کرج ) با در صد آلودگی 8 جنس پوتی ویروس، قطعه CP با استفاده از جفت آغازگر اختصاصی طراحی شده بر اساس ناحیه RT-PCR 82 % از بنه های تحت تیمار رشد کردند که از تعداد کل / 750 جفت بازی تکثیر گردید. در تیمار گرمادرمانی 5 30 % عاری از ویروس بودند. در کشت مریستم بنه های آلوده تنها به میزان 2% رشد به / بنه های تیمار شده، 3 صورت تولید کالوس در ریزنمونه هایی به ابعاد 5 میلی متر دیده شد که در مراحل بعدی از بین رفتند و در سایر ریزنمونه ها باززایی اتفاق نیافتاد. همچنین در تکنیک کشت مریستم توام با گرمادرمانی رشدی مشاهده نشد و ارزیابی قابلیت این دو تکنیک در عاری سازی بنه ها از ویروس منتفی گردید. برای بررسی علل مربوط به باززایی محدود مریستم های زعفران در شرایط رشد درون شیشه ای، کشت مریستم گلایول به عنوان گیاه شاهد همراه با کشت مریستم زعفران در ابعاد بزرگتر ( 10 میلی متری) انجام گردید که باززایی در مریستم های 6% مشاهده شد. نتایج حاصل از بررسی آلودگی ویروسی برگ / 16 % و در مریستم های زعفران 6 / گلایول 6 های زعفران ایجاد شده در شرایط رشد درون شیشه ای آلودگی به ویروس را نشان داد که به دلیل بزرگ بودن ابعاد مریستم های کشت شده قابل پیش بینی بود. به منظور گسترش زمان جداسازی مریستم ها، شکست خواب بنه های زعفران، از طریق تیمار هورمونی جیبرلیک اسید و تیمار سرمایی ( 4 درجه سانتیگراد) مورد ارزیابی قرار گرفت. شکست خواب بنه های زعفران در حضور هورمون جیبرلیک اسید اتفاق نیافتاد ولی تیمار سرمایی در این مورد موفق عمل کرد. بر اساس نتایج حاصل از بررسی روش های فوق، گرمادرمانی به عنوان روشی موثر در عاری سازی بنه های آلوده به پوتی ویروس می باشد.
- Abstract
- Crocus Sativus plant is member of Iridaceae family which is regarded as world’s most important spice foods. Iran by producing 90% world’s saffron has the first rank in the field of producing and exporting this valuable plant. qualitative and quantitative advancement of this valuable product, requires increasing attempt about it's pathogenic factors specially plant viruses. According to initial not published studies in Iran, Potyvirus is separated from Crocus Sativus plant. In order to recognize potyvirus as a saffron pathogen, it is applied from ACP-ELISA serologic test and RT-PCR molecular test. In order to eliminate virus from corms of Crocus Sativus plant polluted to potyvirus, the effect of meristem culture technique, heat therapy, meristem culture and heat therapy simultaneously is evaluated. To study efficiency of aforesaid techniques for eliminating potyvirus from corms of Crocus Sativus plant, it is applied from ACP-ELISA and IC-RT-PCR tests. According to the result of serologic test among total 780 collected samples, 563 of them were polluted to Potyvirus; in which, Mohammadshahr of Karaj with 75.8% pollution has the highest share among collected samples. Upon performing RT-PCR molecular test by using specialty primers and designed on CP area of virus, there was duplication in fragment of 750 bp. Results of heat therapy treatment showed 82.5% growth of corms; in which, 30.3% of them showed virus elimination. Results of meristem culture treatment showed 2% growth as producing Calous at micro-samples having 5mm separation and there was no any similar event in other micro-samples. other inner glass growth stages of produced calluses were not fulfilled which was impossible to evaluate ability of this technique for eliminating virus. Results of meristem culture technique with heat therapy simultaneously did not show remarkable growth and was impossible to evaluate ability of this technique for eliminating corms from aforesaid virus. To study reasons of limited regeneration of saffron meristem under inner glass growth condition, meristems of gladiol as indicator plant with saffron meristems are seprated in larger size ( 10 mm) and cultured under equal conditions that Results showed 16.6% regeneration at gladiol meristems and 6.6% regeneration at saffron meristems. Results of studying pollution of produced saffron leaves under inner glass growth condition to Potyvirus, showed pollution to virus which was predicted due to great size of meristem. For increasing of meristem sepration time, effect of hormone jiberlik acid treatments and coldness treatment (4Co) on breaking saffron dormancy were evaluated.There was no break of Crocus Sativus plant by presence of acid jiberlik hormone; however, coldness treatment had successful performance in this relation. According to the results of study, the heat therapy is the most effective method for Potyvirus eliminating from saffron polluted corms.
