عنوان پایان‌نامه
اثر افزودن عصاره رزماری در محیط رقیق کننده بر پارامترهای کیفی اسپرم خروس بعد از انجماد
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 77268;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 77268
- تاریخ دفاع
- ۲۶ بهمن ۱۳۹۳
- دانشجو
- هانیه شفیق
- استاد راهنما
- سعید زین الدینی
- چکیده
- انجماد اسپرم با تنش اکسیداتیو ناشی از گونه های فعال اکسیژنی (ROS) در ارتباط است که موجب اعمال تغییرات فیزیکی و شیمیایی در غشاء اسپرم می شود. کاهش در تحرک، قابلیت زنده مانی اسپرم به دلیل پراکسیداسیون لیپیدها ناشی از تولید بیش از حد ROS ها در طول مراحل مختلف نگهداری مایع منی می باشد. هدف از این پژوهش، بررسی اثر غلظت‌های متفاوت اسانس رزماری (تیمار شاهد، تیمارهای mg/L 10، mg/L 12/5، mg/L16/6، mg/L 25 و mg/L 50) در رقیق کننده منی بر فراسنجه‌های ارزیابی اسپرم بعد از فرایند انجماد- یخ گشایی اسپرم خروس بود. این پژوهش در قالب طرح کاملا تصادفی با 10 خروس نژاد راس که همه خروس ها از یک گله انتخاب شدند و تحت شرایط محیطی (تغذیه ای، دمایی و نوری) یکسان قرار داشتند، اجرا شد. فراسنجه‌های منی شامل جنبایی، زنده مانی، یکپارچگی غشاء، میزان تولید MDA، آپوپتوزیس و فعالیت میتوکندریایی اسپرم، پس از انجماد و یخ گشایی برای تیمارهای مختلف اندازه?گیری شد. جنبایی با روش CASA و درصد اسپرم های زنده با رنگ?آمیزی ائوزین- نگروزین انجام شد. یکپارچگی غشا با استفاده از تست هاست، میزان تغییرات MDA حاصل از پراکسیداسیون لیپیدهای منی به روش تیوباربیتوریک اسید (TBA) و با استفاده از اسپکتروفتومتر تعیین شد. درصد اسپرم های زنده، متحمل آپوپتوز و مرده به وسیله کیت آنکسین، فعالیت میتوکندریایی با استفاده از رنگ رودامین و به وسیله دستگاه فلوسایتومتر ارزیابی شد. نتایج حاصل نشان داد که اسانس رزماری به طور معنی داری در غلظت های 10 و 12/5 میلی گرم بر لیتر سبب بهبود جنبایی کل شد. علاوه بر این، سطوح 10، 12/5 و 16/6سبب بهبود حرکت پیشرونده اسپرم و نیز زنده مانی قبل از انجماد شدند. میزان MDA با افزایش سطوح اسانس رزماری در محیط رقیق کننده کاهش پیدا کرد و در سطوح10، 12/5و 16/6نسبت به تیمار شاهد به طور معنی داری کاهش یافت، اما موفق به تغییر فعالیت میتوکندریایی اسپرم نشدند (0/05 p?). همچنین سطوح 10، 12/5و 16/6به طور معنی داری سبب افزایش اسپرم های زنده و کاهش آپوپتوز اولیه شدند. مطابق با نتایج این پژوهش به نظر می رسد که افزودن mg/L 10 از اسانس رزماری در رقیق کننده منی خروس باعث بهبود فراسنجه‌های اسپرم از جمله جنبایی، زنده‌مانی و کاهش پراکسیداسیون لیپیدی می شود. لذا می توان از آن به عنوان یک آنتی اکسیدان مناسب در رقیق سازی مایع منی طیور استفاده نمود. با این حال، مطالعات بیشتری برای آشکار ساختن جز فعال موجود در اسانس رزماری که کیفیت اسپرم را پس از یخ گشایی بهبود می بخشد مورد نیاز است.
- Abstract
- Cryopreservation of sperm is correlate with oxidative stress due of reactive oxygen species (ROS) that causes physical and chemical changes in the sperm membrane. Decrease in motility and sperm viability due to lipid peroxidation caused by the overproduction of ROS during various stages of semen storage. The aim of present research was study the effect of various concentrations of rosemary (Rosmarinus officinalis.L) extract (control treatment, treatments of 10 mg/L, 12.5 mg/L, 16.6 mg/L, 25 mg/L and 50 mg/L) in semen extender on sperm evaluation parameters after freezing-thawing process of rooster sperm. This study was performed based on a completely randomized design, by using of 10 Ross breed rooster that all roosters was selected from a herd and they were the similar environmental conditions (nutrition, temperature and light). Semen parameters such as motility, viability, membrane integrity, the level of MDA, apoptosis and sperm mitochondrial activity were measured for different treatments after freezing-thawing. Motility was assessed by CASA and the percentage of alive spermatozoa were determined by the eosin–nigrosin staining. Membrane integrity was determined by HOST test. Amounts of MDA changes due of lipid peroxidation was assessed by thiobarbituric acid (TBA) method and using a spectrophotometer. The percentage of alive sperm, undergo apoptosis and died was determined by annexin kit. Mitochondrial activity was assessed using rhodamine dye by flow cytometry. The results showed that the treatments of 10 and 12.5 mg/L of Rosemary significantly improve the motility, in addition, treatments 10, 12.5 and 16.6 mg/L improved progressive motility and viability before freezing. Increase of rosemary (Rosmarinus officinalis.L) extract increased levels of MDA compared to the control But did not change the sperm mitochondrial activity (p? 0.05). Also treatments 10, 12.5 and 16.6 mg/L significantly increased alive sperm and decreased primary apoptosis. According to this results, it seems that the addition of 10 mg/L of rosemary (Rosmarinus officinalis.L) extract to the rooster semen extender caused improve of sperm parameters such as motility, viability and reduce the lipid peroxidation. Therefore, it can be useful as a suitable antioxidant in poultry semen extender. However, more studies is necessary to reveal the active component of rosemary extract which cause improve sperm quality after thawing. Key words: antioxidant, rooster sperm, freezing-thawing, Rosemary extract
