عنوان پایان‌نامه

بررسی مهاجرت، تهاجم و چسبندگی دودمان سلولی انسانی سرطان تخمدان SKOV-۳ در حضور پروتئین نوترکیب انسانی گالاکتین- ۳



    دانشجو در تاریخ ۲۷ بهمن ۱۳۹۳ ، به راهنمایی ، پایان نامه با عنوان "بررسی مهاجرت، تهاجم و چسبندگی دودمان سلولی انسانی سرطان تخمدان SKOV-۳ در حضور پروتئین نوترکیب انسانی گالاکتین- ۳" را دفاع نموده است.


    رشته تحصیلی
    زیست شناسی -سلولی تکوینی
    مقطع تحصیلی
    کارشناسی ارشد
    محل دفاع
    کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5904;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73044;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5904;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73044
    تاریخ دفاع
    ۲۷ بهمن ۱۳۹۳
    دانشجو
    هما حسینی
    استاد راهنما
    قمرتاج حسین
    چکیده
    لینک فایل چکیده
    Galectinها پروتئین های دارای توالی حفاظت شده با عملکرد شناسایی کربوهیدرات ها هستند که از طریق این توالی با بتاگالاکتوزئیدها متصل میشوند. تغییرات اساسی در گلیکوزیلاسیون سلولی یکی از مشخصه های اساسی سلول های سرطانی میباشد در نتیجه Galectin ها میتوانند در تومورزایی و پیشبرد سرطان ها نقش اساسی ایفا نمایند. در این بین نقش موثر Galectin-3 (Gal-3)در بسیاری از عملکردهای سلولی از جمله تقسیم سلولی، مهاجرت، تهاجم، چسبندگی و متاستاز شناخته شده است. دودمان سلولی سرطان تخمدان SKOV-3 قابلیت متاستازی بالایی دارد و همچنین Gal-3 را به خوبی بیان می کند. تاکنون نقش این پروتئین در پیشبرد سرطان تخمدان شناسایی نشده است. هدف از این مطالعه بررسی نقش پروتئین نوترکیب انسانی Galectin-3 (rhGal-3) در مهاجرت، تهاجم و چسبندگی بوده است. علاوه بر این اختصاصیت اثر آن با استفاده modified citrus pectin Pectasol-C (Pect-MCP) به عنوان مهارگر Gal-3 روی سلول های SKOV-3 بررسی شده است. نتایج ما نشانگر ، 39% افزایش مهاجرت و 47.3% افزایش تهاجم در سلول های تیمار شده با غلظت3.0µM rhGal-3 نسبت به کنترل بودند (P<0.01). در حالیکه سلول های تیمار شده با غلظت 0.1% Pect-MCP، 35.5% کاهش مهاجرت و 51.5% کاهش تهاجم نسبت به کنترل را نشان دادند. سلول های تیمار شده با حضور همزمان 3.0 ?M rhGal-3/0.1% Pect-MCP چه در مهاجرت و چه در تهاجم تغییر محسوسی نسبت به کنترل نشان نداند. به دنبال آن تست ترمیم خراش نیز درتایید داده های در تست مهاجرت انجام شد. همچنین به منظور تعیین نقش Gal-3 به عنوان عامل کموتاکتیک rhGal-3 در زیر transwellها اضافه شد که نشانگر مهاجرت سلول ها در غلظت 3.0?M 104% و در غلظت 300nM، 88% افزایش نسبت به کنترل داشتند(P<0.001). چسبندگی سلولی نسبت به کنترل در غلظت3.0µM rhGal-3 35% افزایش (P<0.01)، درحالیکه در حضور 0.1% Pect-MCP 26% کاهش نشان داد(P<0.001). هم چنین افزایش بیان E-cadherin در حضور rhGal-3 به میزان 28% نسبت به کنترل مشاهده شد.درحالیکه سلول های تیمار شده با 0.1% Pect-MCP نشانگر کاهش بیان E-cadherin به میزان 59% نسبت به کنترل بودند(P<0.01). درجمع داده های ما نشان داد که rhGal-3 میتواند در چسبندگی، تهاجم، مهاجرت، بیان Ecadherinها و داشتن نقش کموتاکتیک در سلول های سرطانی تخمدان نقش داشته باشد.
    Abstract
    Galectins are a family of proteins with conserved sequences which recognize carbohydrates (CRD) which allows them to bind to ?-galactosids. Changes in cellular glycosylation are one of the fundamental features of cancer cells and it has been demonstrated that galectins can play a fundamental role in tumorgenesis and cancer promotion. Galectin-3 (Gal-3) may play a role in various functions in development and cancer including cell proliferation, migration, invasion, adhesion and metastasis. Human ovarian cancer line SKOV-3 has a high metastatic potential that strongly expresses Gal-3 however, its role in important processes such as migration, invasion and adhesion in ovarian cancer remains unknown. Hence, the purpose of this study was to investigate the role of Gal-3 in migration, invasion, and adhesion and chemotaxis of SKOV-3 cells by using human recombinant protein Gal-3 (rhGal-3) and/or Pectasol-C modified citrus pectin (Pect-MCP) as a specific inhibitor of Gal-3 In cells treated with rhGal-3 (3.0?M), there were 39% increased cell migration and 47.3% increased cell invasion compared to the control as revelaed by transwell migration and invasion assay (P<0.01). Whereas, cells treated with 0.1% Pect-MCP, there were 35.5% and 51.5% reduced migration and invasion compared to control, respectively (P<0.01). Moreover, invasion or migration remained unchanged in the presence of rhGal-3 + Pect-MCP in combination. In addition wound healing assay showed similar results regarding cell migration in the presence of rhGal-3, Pect-MCP alone or in combination. To determine the role of Gal-3 as a chemotactic factor rhGal-3 was added in the lower chamber of transwells instead of serum. This showed 2-fold and 0.88-fold increased migration compared to control (P<0.001). Furthermore, for cell adhesion assay, rhGal-3 was immobilized on matrigel coated wells for 2h, then cells were seeded and adhesion was assessed after 15 min. This showed 35% increased cell adhesion in immobilized rhGal-3 wells compared to control (P<0.01). However, pre-treated cells with Pect-MVP showed 26% reduced cell adhesion to matrigel coated wells compared to control (P<0.001). As rhGal3 affected cell migration, invasion and adhesion, we further sought to determine E-cadherin expression levels in the presence or absence of rhGal-3 or Pect-MCP. We found 28% increased expression of E-cadherin in the presence of rhGal-3 compared to control whereas, there was 59% decreased E-cadherin levels in cells treated with Pect-MCP compared to control (P<0.01). In summery our results suggest that rhGal-3 could be a useful target in ovarian cancer therapy.