عنوان پایان‌نامه
ترکیب اثر پکتین تغییر یافته مرکبات (MCP) و داروی دوکسوروبیسین برمرگ برنامه ریزی شده سلولی (آپوپتوز) بواسطه القا نیتریک اکساید (NO) در دودمان سلولی سرطان سینه موش (۴T۱)
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم جانوری -فیزیولوژی جانوری
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5619;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 67545
- تاریخ دفاع
- ۱۴ بهمن ۱۳۹۳
- دانشجو
- شبنم اسفندیارپور
- استاد راهنما
- حوری سپهری
- چکیده
- یکی از مواد شیمیایی شناخته شده در القا آپوپتوز، دوکسوروبیسین می باشد. سرطان سینه یکی از شایع ترین علل مرگ در میان زنان است که مطالعات زیادی در این زمینه صورت می گیرد. به علت اثرات جانبی داروهای شیمیایی نظیر دوکسوروبیسین، مطالعات زیادی جهت استفاده از داروهایی با منشا طبیعی و بدون عوارض جانبی برای سرطان در حال انجام می‌باشد. پکتین ها ترکیبات غنی از پلی‌ساکارید گیاهی هستند که غالبأ از میوه هایی نظیر سیب و مرکبات بدست می-آیند. در بررسی حاضر اثر ترکیبی پکتین تغییر شکل یافته مرکبات(MCP) و دوکسوروبیسین بر مرگ برنامه ریزی شده سلولی(آپوپتوز) بواسطه القا نیتریک اکساید(NO) در دودمان سلولی سرطان سینه موش(4T1) مورد بررسی قرار گرفته است. از تست MTT به منظور تعیین اثرات دوکسوروبیسین و MCP بصورت تکی و ترکیب همزمان بر روی سلول های 4T1 استفاده کردیم که دوز موثر2/MCP، (mg/ml5) و دوز موثر دوکسوروبیسین( g/ml5) بدست آمد. در نهایت با استفاده از نرم افزار compusyn اثر سینرژیسم آن ها تعیین شد. نتایج نشان داد که ترکیب دوکسوروبیسین و MCP باعث مهار رشد سلول های 4T1 می گردد و همچنین نتایج فلوسایتومتری نشان داد که ترکیب دوکسوروبیسین و MCP باعث توقف سلول ها در فاز S چرخه سلولی می شود. سنجش میزان رهایش NO با استفاده از روش واکنشگر گریس انجام شد که بیانگر این بود که میزان NO در حالت ترکیب دو ماده به میزان قابل توجهی افزایش می یابد. خصوصیات مورفولوژی سلول ها با استفاده از رنگ آمیزی آکریدین اورنج/اتیدیوم بروماید مورد بررسی قرار گرفت. در نهایت به منظور بررسی سطح پروتئین های درگیر در مسیر آپوپتوز مثل نسبت Bax/Bcl-2، PARP و 3-Caspase از وسترن بلات استفاده شد که نتایج بدست آمده تایید کردند که سطح این پروتئین ها در حالت تیمار سلول ها بصورت ترکیب دوز موثر دوکسوروبیسین و MCP در مقایسه با تیمار سلول ها با دوزهای موثر هر کدام از دو ماده بصورت تکی، افزایش می یابد. در مجموع این نتایج پیشنهاد می کنند که دوکسوروبیسین در ترکیب با MCP می تواند به عنوان یک روش درمانی مناسب برای سرطان سینه باشد. واژگان کلیدی: آپوپتوز، دوکسوروبیسین، سرطان سینه، پکتین تغییر شکل یافته مرکبات، نیتریک اکساید
- Abstract
- Doxorubicin is one of the most general chemotherapic drugs which induces apoptosis. Breast cancer is responsible for considerable annual death in women, though many research have been done to treat and control it. Due to wide range of chemotherapic side effects such as doxorubicin, several studies have been done on natural product to cure cancer. Pectins are herbal complex components enriched polysaccharide chains. This component mostly obtains from citrus and apple. In this study, the effect of doxorubicin combination with Modified Citrus Pectin (MCP) on apoptosis induction in breast cancer cell line, 4T1 is under investigated. It was proposed this apoptotic effect was achieved via NO secretion. The MTT assay was applied to determine cytotoxicity effects of the agents (alone and combination) and assess effective concentrations. (MCP (2.5mg/ml) and Doxorubicin (5 g/ml)). Finally, synergism was obtained with compusyn software. These results showed that combination of MCP and doxorubicin strongly inhibited cell growth. Flow cytometry analysis showed that the cells were arrested at S phase of cell cycle. NO (NO2 ) releasing measured with an indirect method via Griess reagent revealed NO level was increased significantly in combined status. Morphological features of apoptosis was detected with Acridine Orange/Ethidium Bromide (AO/EB) double staining. Finally expression of proteins involved in apoptotic pathways was followed by western blotting of Bax/Bcl-2 ratio, Caspase-3 and PARP. Interestingly, blotting data confirmed that the combination of effective doses of Doxorubicin and MCP caused greater expression of apoptotic protein, compare to the effective dose of Doxorubicin and/ or MCP alone. Overall, these results strongly suggest that doxorubicin in combination with MCP could be a candidate for chemoprevention agent of breast cancer. Key word: apoptosis, doxorubicin, breast cancer, modified citrus pectin, nitric oxide
