عنوان پایان‌نامه
شناسایی جدایه های مختلف
- رشته تحصیلی
- مهندسی‌کشاورزی-بیماری‌شناسی‌گیاهی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 44677;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 348
- تاریخ دفاع
- ۲۱ مهر ۱۳۸۸
- دانشجو
- نیوشا شیرمحمدی
- استاد راهنما
- رضا امیری
- چکیده
- کپک خاکستری سیب که توسط Botrytis spp ایجاد می شود، از نظر اهمیت بعد از کپک آبی، دومین بیماری بعد از برداشت سیب به حساب می آید .در این تحقیق 29 جدایه از Botrytis مورد بررسی قرار گرفت که 8 جدایه از سردخانه مهرشهرکرج، از سطح میوه های سیب آلوده به قارچ عامل بیماری بدست آمد و 21 جدایه نیز از آزمایشگاه بیماری شناسی پردیس ابوریحان دریافت شد. جدایه ها جهت استخراج DNA، روی محیط مایع (malt-yeast extract broth) M.Y.E کشت داده شدند و استخراج DNA با روش ویلند Weiland, 2002)) با مقداری تغییرات انجام شد. به منظور شناسایی گونه، از نشانگر PCR-RFLP و آغازگرهای BA2f و BA1r استفاده گردید. در تمام 29 جدایه Botrytis پس از PCR با دو آغازگر BA2f و BA1r و الکتروفورز محصول PCR، یک باند یکسان در حدود bp 413 مشاهده شد. سپس هضم آنزیمی محصول PCR توسط آنزیمApoI صورت گرفت و جدایه ها پس از الکتروفورز محصول هضم شده، در دو گروه جای گرفتند. جدایه های D4، A2، D5، B3، F4، 16RJ، 20RJ و 17RJ از یک گروه و جدایه های B1، F6، BM1، B2، BM11، X، F7 و F8 از گروه دیگر به طور تصادفی برای شناسایی مورفولوژیک انتخاب شدند. همچنین در این بررسی از PCR اختصاصی گونه B.mali با استفاده از آغازگرهای Bstok-Bt-294r و Bt-Lev-Up4 و PCR اختصاصی گونه B.cinerea با استفاده از آغازگرهای Bcin-Bt-366r و Bt-Lev-Up4 جهت شناسایی جدایه های مورد بررسی استفاده گردید. سرعت رشد جدایه ها نیز بعد از 4 روز در هفت دمای مختلف (5، 10، 15، 20، 25، 30 و 35 درجه سانتی گراد) روی محیط PDA بررسی شد. در نهایت با مقایسه نتایج حاصل از بررسی مورفولوژی ماکروسکوپی و میکروسکوپی جدایه ها، PCR-RFLPs ، PCR اختصاصی شناسایی دو گونه Botrytis cinerea و Botrytis mali و همچنین مقایسه سرعت رشد جدایه ها، از 29 جدایه مورد بررسی، 10 جدایه تحت عنوان گونه B.cinerea و 19 جدایه تحت عنوان گونه B.mali شناسایی شدند. کلمات کلیدی: کپک خاکستری سیب، نشانگر مولکولی ،PCR-RFLP، PCR اختصاصی، سرعت رشد
- Abstract
- Gray mould on apple caused by Botrytis spp, is the second postharvest disease of apple. Twenty nine isolates of Botrytis spp were collected from the surfaces of apple fruit. Aggressivenes of native straines was determined by measuring the diameter of lesion induced on apple fruit after wound inoculation then Botrytis isolates were identified with morphological characterization. Molecular identification of the isolates was performed with PCR- RFLP marker with BA2f and BA1r primers. Twenty nine isolates of Botrytis, after PCR with BA2f and BA1r primers and electerophoresis of PCR product, amplifed one band about 413-bp then they digested with ApoI enzyme, and after electrophoresis isolates divided in two groups. For identification of isolates, also, used specific PCR for B.mali with Bstok-Bt-294r and Bt-Lev-up4 primers and used specific PCR for B.cinerea with Bcin-Bt-366r and Bt-Lev-up4 primers. Growth rate of isolates after 4 days in seven different temperature (5, 10, 15, 20, 25, 30 and 35 ?C) on PDA were determined. In conclusion, 10 isolates were identified as B. cinerea and 19 isolates were identified as B. mali. Keywords: apple grey mould, growth rate, molecular marker, PCR-RFLP, specific PCR.
