عنوان پایان‌نامه
تولید آنزیم اینولیناز نوترکیب
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم‌سلولی‌مولکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 4801;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 54241
- تاریخ دفاع
- ۳۰ بهمن ۱۳۹۰
- دانشجو
- ماندانا اسدی فر
- استاد راهنما
- مهران حبیبی رضائی
- چکیده
- اندواینولیناز یک ?-D- فروکتان فروکتانو هیدرولاز (EC 3.2.1.7) از خانواده¬ی گلیکوزید هیدرولاز 32 (GH32) می¬باشد. این آنزیم پیوند¬های (1?2 ?) زنجیره¬های فروکتان و اینولین را می¬شکند. اینولین پلیمری از فروکتوز است که در ریشه¬ی گیاهانی چون کاسنی، کوکب و سیب زمینی ترشی ذخیره می¬شود. اندواینولیناز می¬تواند برای تولید اینولوالیگوساکارید از اینولین مورد استفاده قرار گیرد. اینولوالیگوساکارید دارای خواص پری¬بیوتیک بوده و استفاده از آن در رژیم غذایی منجر به کاهش ریسک ابتلا به سرطان روده¬ی بزرگ می¬گردد. اندواینولیناز همچنین می¬تواند به همراه اگزواینولیناز جهت تولید شربت¬های پرفروکتوز و اتانول نیز از اینولین مورد استفاده قرار گیرد. استفاده از فروکتوز به جای ساکاروز در رژیم غذایی می¬تواند باعث افزایش جذب کلسیم و آهن در خون شود. همچنین فروکتوز توسط افراد دیابتی بهتر تحمل می¬شود و حذف اتانول از خون را افزایش می¬دهد. در این پایان¬نامه ژن اندواینولیناز از ژنومAspergillus niger (PTCC5012) با روش PCR تکثیر و قطعه¬ی تکثیر شده در وکتور pQE 30 کلون گردید. ژن فوق حاوی 1485 جفت باز بوده و پروتئینی به طول 494 اسید آمینه را کد می¬کند. پروتئین بالغ دارای 2 زیرواحد cys و 5 جایگاه فعال جهت اتصال N- گلیکوزیلاسیون به کربوهیدرات می¬باشد. از باکتری E. coli جهت بیان آنزیم استفاده شد. بیان آنزیم با روش SDS-PAGE مورد تایید قرار گرفت. آنزیم فوق در 38 درجه¬ی سانتیگراد فعالیت داشت.
- Abstract
- Endoinulinase is a 2,1-?-D-fructan fructanohydrolase from glycosyl hydrolase family 32. This enzyme hydrolases the ?(2?1) bonds of inulin and fructan chains. Inulin is a polymer of fructose stored in the roots of plants such as chicory, dahlia and Jerusalem Artichoke. Endoinulinase can be used for production of inulooligosaccharide from inulin. Inulooligosaccharide has prebiotic properties and using it in the diet leads to reducing of colon cancer catching risk. Endoinulinase furthermore can be used together with Exoinulinase for production of High Fructose Syrups (HFSs) and ethanol from inulin. Using fructose in the diet instead of sucrose, can enhance absorption of calcium and iron. Fructose is better tolerated by diabetic patient and enhances removal of ethanol from the blood of alcoholics. In this project endoinulinase gene was amplified from A. niger PTCC5012 genome by PCR and the amplified fragment was cloned into pQE 30 vector. This gene consisted of 1485bp encoding the protein of 494 amino acids.The mature protein contained two cys residues and five potential N-linked glycosilation site. E.coli was used as expressing host. Expression of enzyme was confirmed by SDS-PAGE. This enzyme was active at 38?c.
