عنوان پایان‌نامه
تاثیر داروی ضد تومور وینورلبین روی سلولهای مغز استخوان و بررسی میانکنش دارو با اجزا کروماتین )
- رشته تحصیلی
- بیوشیمی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 11043ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 52757
- تاریخ دفاع
- ۱۷ اسفند ۱۳۹۰
- دانشجو
- پریسا پایدار
- استاد راهنما
- عذرا ربانی چادگانی
- چکیده
- چکیده: داروی وینورلبین یک داروی ضد سرطان قوی می‌باشد که به صورت ترکیبی با سایر داروهای شیمی درمانی برای درمان طیف وسیعی از سرطان‌ها به کار گرفته می‌شود. این دارو فعالیت خود را در سلولهای سرطانی با مکانیسم‌های مختلفی انجام می‌دهد و هدف اصلی آن میکروتوبول‌های دوک میتوزی می‌باشند. تحقیقات اخیر نشان داده‌اند که علاوه بر میکروتوبول‌ها، ترکیبات کروماتین نیز می‌توانند به عنوان هدف جدیدی برای اتصال وینورلبین در سلول باشند. از آنجائیکه اکثر داروهای شیمی درمانی جهش‌زا و سرطانزا هستند، علاوه بر سلولهای سرطانی، سلولهای طبیعی را نیز تحت تاثیر قرار می‌دهند به ویژه سلولهایی که از نظر تکثیری فعال هستند. به همین دلیل سلولهای بنیادی مغزاستخوان انتخاب شدند. به طوریکه مطالعه تاثیر داروی وینورلبین بر روی این سلولها، از یک سو مکانیسم اثر این دارو را روشن‌تر می‌سازد و از سوی دیگر اثرات مخرب دارو را روی سلولهای مغزاستخوان آشکار می‌کند. در مطالعه حاضر، ابتدا تاثیر داروی وینورلبین بر روی پروتئین‌های کروماتین سلولهای مغز استخوان موش Balb/C با استفاده از تکنیک‌های الکتروفورز ژل SDS پلی‌آکریل‌آمید و وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت. سلولهای مغز استخوان به مدت 4 ساعت با داروهای وینورلبین تیمار شدند. سپس پروتئین‌های هیستونی و غیر هیستونی استخراج و مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج بدست آمده نشان می‌دهندکه با افزایش غلظت داروی وینورلبین، درصد بقای سلولهای مغز استخوان از 96% در نمونه کنترل به 5/95% و در مورد سلولهای تیمار شده با غلظت 80 میکروگرم در لیتر به 5/55% کاهش یافت. در بررسی پروتئین‌های هیستونی در حضور و عدم حضور دارو با افزایش غلظت دارو، میزان پروتئین‌های هیستونی کاهش می‌یابد. بررسی پروتئین‌های HMG در حضور و عدم حضور دارو مشخص شد که حتی در غلظت‌های پایین دارو نیز میزان پروتئین‌های HMGB کاهش شدیدی را نشان می‌دهد که می‌تواند نتیجه‌ای از اتصال داروی وینورلبین به HMGB باشد و بدین ترتیب آزادسازی این پروتئین‌ها سخت‌تر می‌گردد. در مرحله بعد مطالعات آپوپتوزی انجام شد. بررسی‌های سیتولوژیک از طریق رنگ آمیزی فلوئورسنت آشکار کرده‌اند که سلولهای مغز استخوان در اثر تیمار با داروی وینورلبین دچار آپوپتوز شده‌اند و با افزایش غلظت دارو تعداد سلولهای آپوپتوز شده نیز بیشتر شده است. از آنجائیکه در هنگام
- Abstract
- The effect of antitumor drug vinorelbine on bone marrow cells: Interaction of drug with chromatin components Vinorelbine is a potent anticancer drug is used for wide spectrum of cancers. It is believed that vinorelbine mostly targets the mitotic spindle microtubules resulting in mitosis suppression. In addition, recently it has been suggested that chromatin could be a novel target of vinorelbine. Due to the rapid proliferation ability of bone marrow stem cells, these cells are a main target as a side effects of this drug. In this study, the effects of vinorelbine on non adherent bone marrow cells were investigated employing SDS and agarose gel electrophoresis and western blot analysis. Also the effect of vinorelbine in induction of apoptosis in these cells was studies using DNA fragmentation, fluorescence microscopy and PARP cleavage. Briefly, the cells were obtained from Balb/C mouse and incubated for 4 h in the presence of vinorelbine followed by histone and non-histone protein extraction. Our results showed that, vinorelbine reduced cell viability from 96% in the control to 55.5% in treated cells. Our data demonstrated that vinorelbine reduced the histone proteins on its SDS gel in a dose dependent manner and reduced the HMG proteins significantly. The cytological studies revealed that vinorelbine induced apoptosis in a concentration dependent manner as resulted by fluorescent staining, DNA fragmentation, diphenyl amine and superoxide anion evaluation. To further confirm, PARP cleavage which is occurred in apoptosis circumstances, was assayed. Results indicated that the amount of 89 KD fragment of PARP increased significantly in a dose dependent manner. From the results, it is concluded that vinorelbine interacts with the chromatin components and proceeds the cells into apoptosis. Keywords: Vinorelbine, chromatin, bone marrow stem cells, histone, HMG
