عنوان پایان‌نامه
مقایسه روش میکروسکوپی و PCR در تشخیص آلودگی گوسفندان حامل تیلریا و بابزیا در ۵ منطقه شهرستان خرم آباد
- رشته تحصیلی
- انگل شناسی دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 13 ارشد;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 56939;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 13 ارشد
- تاریخ دفاع
- ۳۰ بهمن ۱۳۹۰
- دانشجو
- شهریار یاوری
- استاد راهنما
- پرویز شایان
- چکیده
- پیروپلاسموز بیماری گوسفند و دیگر نشخوارکنندگان است که از طریق کنه از حیوانی به حیوان دیگر منتقل می شود، پیرو پلاسم ها به دو گروه اصلی تیلریا و بابزیا تقسیم می شوند، این بیماری سالانه خسارت اقتصادی زیادی را به صنعت دامپروری جهان وارد می کند. ایران با داشتن ده ها میلیون گوسفند و بز از قطب های بزرگ دامپروری از لحاظ پرورش نشخوارکنندگان کوچک در جهان است. از مناسب ترین مناطق آب و هوایی با بارندگی کافی برای سیستم پرورشی چرای آزاد و مرتعی در ایران استان لرستان است که 72 درصد جمعیت دامی در آن گوسفند و بز است و واحد دام در هر کیلومتر آن 5/3 برابر میانگین کشورمی باشد، در این میان شهرستان خرم آباد از مراکز مهم دامپروری در این استان است و چند هزار تن در سال تولید شیر و گوشت دارد. پیرو پلاسم های خونی (تیلریا و بابزیا) در این شهرستان نیز از عوامل کم کننده تولید محصولات این صنعت می باشد، و گوسفندان حامل و بدون علامت نیز در ماندگاری و گسترش این بیماری دخیل هستند. هدف این مطالعه مقایسه روشهای میکروسکپی و PCR درتشخیص آلودگی گوسفندان حامل تک یاخته های تیلریا و بابزیا در شهرستان خرم آباد می باشد. در طی تحقیق، DNA از نمونه خون 100 رأس گوسفند مناطق مختلف دامپروری این شهرستان استخراج شد. DNA استخراج شده برای ژن با استفاده از آنالیز برروی ژل آگارز و همچنین PCR با پرایمرهای اختصاصی تأیید شد، سپس طی PCR با پرایمرهای B.actin از لحاظ کمی و کیفی مورد آزمایش قرار گرفت. در مرحله بعد برای تشخیص وجود پیرو پلاسم ها، PCR نمونه با پرایمرهای طراحی شده از ناحیه متغیر ژن بابزیا و تیلریا، صورت گرفت. نمونه های مثبت که دارای ژنوم انگل بودند با این پرایمرها تکثیر شدند و با الکتروفورز روی ژل اگارز و رنگ آمیزی و مشاهده زیر نور UV باند به اندازه ی مشخص محصول هدف ایجاد کردند و بابزیا و تیلریا بودن آن مشخص شد. در این مطالعه ابتدا با روش مشاهده گسترش نازک رنگ آمیزی شده میکروسکوپی نمونه ها بررسی شدند که از 100 نمونه مورد آزمایش 15% آلوده بودند، از این تعداد 12 نمونه (12%) تیلریا را نشان می داد و 3 نمونه (3%) آلوده به بابزیا بودند. در 100 نمونه مورد مطالعه با روش PCR ،28 مورد به پیروپلاسما آلوده بودند که 22 نمونه (22%) به تیلریا و 6 نمونه (6%) به بابزیا آلوده بودند. در مقایسه دو تست میزان توافق ظاهری دوتست برابر 81% می باشد و مقدار آمار کاپا نیز 451/0 می باشد(توافق متوسط) اما آزمون مک نمار اختلاف دو تست را معنی دار دانست (P<0.01). ودرصورتیکه PCR به عنوان یک آزمون طلایی درنظر گرفته شود میزان حساسیت و ویژگی تست آزمایش مستقیم به ترتیب 9/42% و 8/95% محاسبه می گردد.
- Abstract
- In the present study the rate of Theileria and Babesia spp. infection of sheep housing in Khoramabad was determined using PCR technique and traditional giemsa staining method. DNA was extracted from blood samples collected from 100 sheep from five regions of Khoramabad and amplified using specific primers derived from 18S rRNA gene of the mentioned piroplasms by PCR technique and subsequently analyzed on agarose gel using ethidium bromide under UV condition. Additionally, the prepared blood smears from each sheep were analyzed by Giemsa staining method. The results showed that structures assembling the mentioned piroplasms could be detected in 15 blood smears. Twelve of them were determined as Theileria spp. and the remaining 3 as Babesia spp. The PCR results showed that 28 samples were positive. The PCR product specific for Theileria spp. could be amplified in 22 samples (22%). Babesia spp. could be detected in 6 blood samples (6%). The apparent agreement between the performed two tests was 81%. When PCR technique is considered as gold standard method, the sensitivity and specificity of the tests were measured as 42% and 95.8%.
