عنوان پایان‌نامه
جداسازی یک ترکیب پپتیدی فعال زیستی از یک اکتینومیست جداشده از خاک
- رشته تحصیلی
- زیست فناوری (بیوتکنولوژی) - میکروبی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5214;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 60573
- تاریخ دفاع
- ۳۱ شهریور ۱۳۹۲
- دانشجو
- سمیه ایمان پرست
- استاد راهنما
- جواد حامدی
- چکیده
- ترکیبات طبیعی به دلیل تنوع ساختاری بالا و خواص شبه دارویی و فعالیت‌های مختلف علیه بیماری‌ها، نقش مهمی را در صنعت داروسازی دارند. میکروارگانیسم‌ها به ویژه اکتینومیست‌ها از منابع مهم ترکیبات طبیعی فعال می‌باشند. در این مطالعه 21 سویه اکتینومیست نگهداری شده در کلکسیون میکروارگانیسم‌های دانشگاه تهران، که دارای ژن NRPS بودند به منظور یافتن پپتید فعال زیستی غربالگری شدند. پس از طی مراحل تخمیر و استخراج با اتیل‌استات, عصاره‌های خام حاصل، در مرحله اول تحت غربالگری شیمیایی به کمک کروماتوگرافی لایه نازک و معرف‌های مختلف برای شناسایی ترکیبات پپتیدی قرار گرفتند. جهت دستیابی به ترکیبات با خلوص فراتر، عصاره‌های چهار سویه منتخب با کروماتوگرافی لایه نازک با کارایی بالا آزمایش شده و بر اساس نتایج دوسویه Nocardia sp. UTMC 751 و Nocardia sp. UTMC 877 انتخاب شدند. با بررسی خاصیت آنتی بیوتیکی، سیدروفوری و آنتی‌اکسیدانی، سویه Nocardia sp. UTMC 751 به دلیل طیف بیشتر فعالیت زیستی برای خالص‌سازی پپتید تولیدی انتخاب شد. پس از تخمیر در حجم بالا، استخراج مایع تخمیر با حلال انجام شد و عصاره حاصل تحت روش‌های مختلف کروماتوگرافی از جمله ستون‌های سیلیکاژل، سفادکسLH-20، دیول، RP-18 و کروماتوگرافی لایه نازک با کارایی بالا قرار گرفت. در نهایت 2 ترکیب کریستالی و 7 ترکیب غیر کریستالی بدست آمد. از این میان ترکیبات کریستالی H وI به همراه 2 ترکیب، Ea1a?، Ea1a? واکنش مثبت با معرف دیانیزیدن به عنوان معرف آشکارساز پپتیدی نشان دادند. از میان ترکیبات جداسازی شده، ترکیب Fc4a فعالیت سیدروفوری و ترکیبات I , H و Ea1a1 فعالیت آنتی‌اکسیدانی نشان دادند. از میان 9 ترکیب جداسازی شده ترکیبات H و I به عنوان ترکیبات پپتیدی فعال و ترکیبات Ea1a4 و Ea1a3 به عنوان ترکیبات پپتیدی جداسازی شدند که با توجه به مقدار کم این ترکیبات فعالیت‌های آنتی‌بیوتیکی این ترکیبات بررسی نشد. شناسایی این ترکیبات در حال انجام می باشد.
- Abstract
- products with their high chemical diversity, drug-like propertiessuch asabsorption and metabolism and various activities against diseases, have been playing an important role in pharmaceutical research. Microorganisms, especially actinomycetes are a rich source of bioactive compounds. In this study, 21 strains were selected that investigated strains were identified as NRPS gene containing actinomycetes in previous study which was done at microbial biotechnology laboratory of Tehran University. Crude extract of the selected strains were obtained from extraction of the production media using ethyl acetate. The presences of peptide compounds in extracts were investigated by chemical screening of their metabolites by thin layer chromatography and spray reagent techniques, anisaldehyde as a public reagent and Chlorine o-dianisidine as reagent for detection of the Peptide compounds were used. To achieve semi-pure compounds of extracts from selected four strains Preparative Thin-Layer Chromatographywas done. Strains Nocardiasp.UTMC 751 and Nocardiasp.UTMC 877 were selected among peptide producing strainsfor TLC bioassays of their peptide metabolite, including: Antioxidant TLC assay, Antimicrobial TLC assay and siderophore TLC assay. For peptide purification purpose Nocardiasp. UTMC 751 was selected since wide range of biological activities were observed. After large scale fermentation and solvent extraction, crude extract obtained which in turn subjected to various chromatograghic methods using Sephadex LH-20, Diol, RP-18, Silica gel column chromatography, and high-performance thin-layer chromatography to result pure metabolites. Finally 2 crystalline compounds and 7 other compounds were obtained. Among which 2 crystalline compounds, H and I, and Ea1a1, Ea1a3, Ea1a4 showed a positive reaction with non specific reagent for peptides. Among the compounds mentioned above, Fc4a compound and H, I and Ea1a1 showed siderophore and antioxidands were activity, respectively. Between the 9 compounds, the H and I compounds were identified as bioactive peptide compounds and E1a1 and E1a4 compounds were identified as peptide compounds which their antibiotic activity was not assayed due to their low volume.
