عنوان پایان‌نامه
بررسی تاثیر غلظت‌های مختلف ملاتونین در رقیق کننده منی در طول سردسازی بر کیفیت اسبچه خزر
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 5662;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 61988
- تاریخ دفاع
- ۳۱ شهریور ۱۳۹۲
- دانشجو
- غزاله ایزدپناه
- استاد راهنما
- احمد زارع شحنه
- چکیده
- هدف از این مطالعه، بررسی اثرات غلظت‌های مختلف ملاتونین به عنوان یک آنتی اکسیدان بر کیفیت آزمایشگاهی اسپرم اسبچه خزر بود. برای آزمایش‌ها، نمونه‌های منی با استفاده از واژن مصنوعی مدل میسوری دو بار در هفته جمع آوری شد. سپس بخش ژل با استفاده از فیلتر جدا و مورد ارزیابی اولیه قرار گرفت. نمونه‌هابه نسبت 1:1 با رقیق کننده‌ی بر پایه‌ی شیر خشک بدون چربی (کنی) رقیق شدند. نمونه‌ها با دور ×g600 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شدند. پس از سانتریفیوژ، پلاسمای منی حذف و پلیت‌های تشکیل شده با هم مخلوط شدند. نمونه‌های مخلوط شده به 5 گروه مساوی تقسیم و سپس با رقیق‌کننده‌های حاوی غلظت‌های صفر (شاهدمنفی، C)، 1 (M1)، 5/1 (M1.5) و 2 میلی‌مولار ملاتونین (M2) و دی متیل سولفوکساید (کنترل مثبت، به‌عنوان حلال ملاتونین، DC)رقیق شد، به طوری که غلظت نهایی 106×50 اسپرم در هر میلی لیتر بدست آید. جنبایی و سایر خصوصیات جنبایی، زنده‌مانی، یکپارچگی غشا، ناهنجاری کل و پراکسیداسیون لیپیدی نمونه‌های کهدر دمای 5 درجه سانتی‌گراد در یخچال نگه‌داری شده بودند، در زمان‌های 0 (فرش)، 6، 24 و 48 ارزیابی شد.کلیه داده¬ها با استفاده از رویه¬Mixedنرم‌افزار SASآنالیز و نتایج به صورت حداقل میانگین مربعات بیان شد. نتایج نشان داد که اثر اصلی تیمار برای فراسنجه‌های جنبایی و ناهنجاری کل اسپرم معنی‌دار نشد، اما یکپارچگی غشای پلاسمایی، زنده‌مانی و پراکسیداسیون لیپید تفاوت معنی‌داری را نشان دادند (05/0P<). جنبایی کل و پیش‌رونده اسپرم طی زمان 24 در M2 (به ترتیب 12/3± 58/87 ? و 79/2± 45/51?) به‌طور معنی‌داری بیشتر از سایر تیمارها بود (05/0P<). هم چنین طی زمان 48 جنبایی کل در M1.5(12/3± 60/63 ?) به‌طور معنی‌داری بیشتر از تیمارهای M2، Cو DCبود (05/0P<)، اما با تیمار M1تفاوت معنی‌داری نداشت (05/0P>). جنبایی پیش‌رونده در تیمار M2 (9/2± 51/25 ?) به‌طور معنی‌داری کمتر از سایر تیمارها بود، اما بین سایر تیمارها اختلاف معنی‌داری مشاهده نشد. اکثر فراسنجه‌های سرعتی اسپرم به جز ALH، بین تیمارها با هم تفاوت معنی‌داری نشان نداد. درصد یکپارچگی غشای پلاسمایی درM1.5 (5/1± 83/74?) نسبت به تیمار شاهد منفی به‌طور معنی‌داری بیشتر بود، اما بین سایر تیمارها اختلاف معنی‌داری مشاهده نشد. رقیق کننده حاوی 2 میلی‌مولار ملاتونین در مقایسه با تیمارهای شاهد و M1 به‌طور معنی‌داری دارای درصد اسپرم زنده بیشتری بود، اما با تیمار M1.5 اختلاف معنی‌داری نشان نداد. برای درصد ناهنجاری کل اسپرم بین تیمارها طی زمان‌های مختلف، اختلاف معنی‌داری مشاهده نشد. میزان پراکسیداسیون لیپید (مالون آلدهید) در تیمارهای M1.5 و M1.5 (به ترتیب 10/0± 78/0 و 10/0± 75/0 نانو مول/میلی لیتر) نسبت به C(10/0± 13/1) به‌طور معنی‌داری کمتر بود. در نتیجه افزودن غلظت 5/1 میلی‌مولار ملاتونین به رقیق‌کننده‌ی منی، موجب حفظ جنبایی کل، جنبایی پیش‌رونده و یکپارچگی غشای پلاسمایی و غلظت 5/1 و 2 میلی‌مولار سبب بهبود زنده‌مانی و کاهش پراکسیداسیون لیپید اسپرم طی سردسازی شد. بنابراین پیشنهاد می‌شود برای بهبود کیفیت آزمایشگاهی اسپرم اسبچه خزر، از غلظت 5/1 میلی‌مولار ملاتونین در رقیق کننده منی در طی ذخیره‌سازی به شکل مایع در دمای 5 درجه سانتی‌گراد استفاده شود.
- Abstract
- The objective of this study was to evaluate the effects of melatonin as an antioxidant on in vitro quality of Caspian stallion spermatozoa. For the experiments, five ejaculates collected from each 3 Caspian stallions by Missouri artificial vaginain breeding season and twice a week. After collection, the semen samples was filtered and then evaluated. Good sample were diluted were 1:1 (v/v) with skim milk base-extender (Kenney's extender). Then diluted semen centrifuged with 600 × g for 10 minute. After centrifuge, semen plasma (supernatant) remove andplates pooled together. Pooled samples divided to 5 equal parts and diluted with extenders contain different concentrationof [(0 (control, C), 1, 1.5 and 2 mM) of melatonin and DMSO positive control group (as melatonin solvent, DC)] to a final concentration of 50 × 106 sperm/mL. Motility and other motion characteristics, viability, plasma membrane integrity, total abnormality and lipid peroxidation were determined at 0 (fresh), 6, 24 and 48 h. All the data analyzed using SAS software and Mixed procedure and results were expressed as the least square means.The results showed that main effect of treatment not significant for motility parameters and total abnormality, but plasma membrane integrity, viability and lipid peroxidation indicated significance difference. Total and progressive motility (87.58±3.12% and 51.45±2.79% respectively) were significantly higher in M2 compared to other treatments during the 24 h storage. Also, during the 48 time total motility (63.60±3.12%) was significantly higher in M1.5 than M2, C and DC, but not significant with M1.5. Progressive motility (25.51±2.79%) was significantly lower in M2 than other treatments, but not significant shown between other treatments. In addition, Sperm motion parameters (VAP, VSL, VCL, BCF, LIN and STR) not showed significant difference among all treatments, with the exception of ALH. Percentage of plasma membrane integrity was significantly higher in M1.5 (74.83±1.5%) than C, but there was no significant difference between other treatments together. The extender contains 2 mM melatonin significantly contain higher percentage of viable spermatozoa in compare with C and M1 extenders, but not significant difference with M1.5. There were no significant differences obtained for percentage of total abnormal spermatozoa among all treatments. Lipid peroxidation (malondialdehyde levels, MDA) in M1.5 and M2 (0.78±0.10% and 0.75±0.10% nmol/ml, respectively) were significantly lower than C (1.13±0.10 nmol/ml). In conclusion, the addition of 1.5 mM melatonin in semen extender caused the maintenance of total and progressive motility and plasma membrane integrity and 1.5 and 2 mM caused the improvement of sperm viability and reduce the malondialdehyde levels (MDA). It suggest that the 1.5 mM concentration of melatonin used in semen extender as an antioxidant for improvement of the in vitro quality of Caspian stallion sperm during liquid semen storage at 4 0C.
