عنوان پایان‌نامه
«بررسی آنزیم های گوارشی (آمیلاز و پروتئیناز ) پروانه مینوز گوجه فرنگی( Tuta absoluta (Lep.: Gelechiidae »
- رشته تحصیلی
- حشره شناسی کشاورزی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 5643;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 60093
- تاریخ دفاع
- ۳۱ شهریور ۱۳۹۲
- دانشجو
- ثریا حیدروش
- استاد راهنما
- علیرضا بندانی, قدرت اله صباحی
- چکیده
- شب پره مینوز گوجه فرنگی Tuta absoluta (Meyrick, 1917) (Lep.:Gelechiidae) از گیاهان خانواده سولاناسه تغذیه کرده و بیشتر در نواحی که گوجه فرنگی کشت می¬شود دیده می¬شود. خسارت آفت مربوط به تغذیه لارو است که از برگ¬ها، ساقه-ها و میوه¬ها تغذیه می¬کند. علاوه بر تغذیه، فضولات زیادی از خود بر جای می¬گذارد که سبب آلودگی و کثیف شدن میوه ها می¬شود. کنترل آفات با استفاده از ارقام مقاوم یکی از مهم¬ترین روش¬ها است که می¬تواند به وجود مهارکننده¬ها در گیاهان مربوط باشد. از این¬رو، مطالعه ویژگی¬های آنزیم¬های گوارشی به ویژه اثر مهارکننده¬ها روی فعالیت آنزیم می¬تواند از یک طرف برای درک بهتری از نقش آنزیم-ها در تغذیه و فیزیولوژی حشرات و از سوی دیگر برای رسیدن به کنترل¬های سالم و مفید از حشرات باشد. بنابراین هدف از این مطالعه حاضر بررسی برخی ویژگی های آنزیم آلفا-آمیلاز و پروتئازهای شب پره مینوز گوجه فرنگی می¬باشد. برای این منظور لاروهای حشره تشریح شدند و پس از جداسازی دستگاه گوارش عصاره آنزیمی استخراج شد. اسیدیته و دمای بهینه فعالیت آمیلاز به ترتیب 8 و 40 درجه سلسیوس بود.¬¬در زیموگرام فعالیت آمیلازی یک ایزوآنزیم در تمام سنین لاروی مشاهده شد. اسیدیته و دمای بهینه فعالیت پروتئازی به ترتیب 7 و 35 درجه سلسیوس بود. و در زیموگرام فعالیت پروتئولیتیک حداقل چهار باند در لارو سن چهارم مشاهده شد. بررسی تاثیر عصاره پروتئینی روی فعالیت آنزیم آلفا-آمیلاز به دو روش سنجش آنزیمی و سنجش در ژل زایموگرام انجام شد. غلظت های 5/1، 75/0، 37/0، 18/0، 09/0، 045/0 میلی گرم بر میلی لیتر برای تریتیکاله و 28/0، 14/0، 07/0، 03/0، 01/0، 008/0 میلی¬گرم بر میلی¬لیتر برای شاه پسند استفاده شد. نتایج نشان داد که مهارکننده های تریتیکاله و شاه¬پسند در بالاترین غلظت به ترتیب 28/0 و 5/1 میلی¬گرم بر میلی¬لیتر باعث مهار 7/98 درصدی فعالیت آلفا آمیلاز شب پره مینوز گوجه فرنگی شدند. در هردو مورد روند مهارکنندگی وابسته به غلظت و اسیدیته بود. اثر مهارکننده¬های TLCK، TPCK، SKTI و DTT روی فعالیت پروتئولیتیک مورد بررسی قرار گرفت. میزان مهارکنندگی TLCK و TPCK در زایموگرام ژل، بیشتر از بقیه بود.
- Abstract
- The tomato leafminer Tuta absoluta (Meyrick,1917)(Lepidoptera: Gelechiidae),feedson Solanaceae species and exist in most area that tomato is cultivated.Damage is caused by larval feeding which attacks its leaves, buds, stems and fruit and deposited excreta which contaminate the fruit.Control of pests by usingresistant varieties is one of themost important practices that are dependent on inhibitors in plants. Hence, characterization of digestive enzymes, especially theeffect of inhibitors on enzyme activity, could be useful, on the one hand for a better understanding of enzyme roles in the nutritionphysiology of insects, and on the other hand to reach safe and useful controls of insect pests.So the aim of this study¬¬was to investigate enzyme digestivecharacterization proteases and ?-amylase from tomato leafminer. Laboratory reared 4th instar larvae were randomly selected. fourth insect instar larvae were dissected, their guts isolated and the digestive enzymes was obtained.The optimalpH and temperature for ?-amylaseenzyme activitywere 8 and 40?C.the gel electrophoresis one amylase bands was observed for all larva.The optimalpH and temperature for proteases enzyme activity were 7 and 35 ?C.the gel electrophoresis fourproteolitic bands was observed for fourth Larve.The effect of plant proteinaceous extract on amylase activity were investigated in gel assay and spectrophotometry. Result showed that bothinhibitor triticale and Verbena in high dose 1.5 and 0.28respectivelyinhibited tuta absoluta amylase 98.7 percent.These inhibitors show pH and dose dependency.Effect inhibitor TLCK، TPCK، SKTI and DTT on proteolitic activityinvestigate.inhibitor range TLCK and TPCKwas the more in gel assay.
