عنوان پایان‌نامه

بررسی مهاجرت و تهاجم دودمان سلولی انسانی سرطان تخمدان Skov-۳ در حضور Pectasol



    دانشجو در تاریخ ۱۲ خرداد ۱۳۹۲ ، به راهنمایی ، پایان نامه با عنوان "بررسی مهاجرت و تهاجم دودمان سلولی انسانی سرطان تخمدان Skov-۳ در حضور Pectasol" را دفاع نموده است.


    رشته تحصیلی
    زیست‌شناسی-علوم جانوری - تکوینی جانوری
    مقطع تحصیلی
    کارشناسی ارشد
    محل دفاع
    کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5153;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 59789
    تاریخ دفاع
    ۱۲ خرداد ۱۳۹۲
    دانشجو
    سمیرا احمدی
    استاد راهنما
    قمرتاج حسین
    چکیده
    لینک فایل چکیده
    Galectin‎ها گروهی از پروتئین‌هایی هستند که از طریق توالی حفاظت شده‌ای به نام ناحیه شناسایی کربوهیدرات (CRD‎) به بتا گالاکتوزید ها متصل میشوند. Gal-3‎ به خاطر نقشی که در تومور زایی و پیشرفت سرطان از طریق دخالت در تقسیم سلولی، آپوپتوز، چسبندگی، تهاجم و متاستاز دارد، شناخته شده است که این عملکردها را از طریق اتصال به توالی N‎-استیل لاکتوز آمین گلیکو پروتئین‌ها و یا گلیکو لیپیدهای سطح سلولی انجام می‌دهد. دودمان سلولی سرطان تخمدان SKOV-3‎ بسیار متاستازیک بوده و Gal-3‎ را بیان می‌کند اما نقش این پروتئین هنوز به خوبی مشخص نشده است. هدف از انجام این مطالعه بررسی نقش Gal-3‎ در چسبندگی، تشکیل و بقا کلنی، تهاجم و مهاجرت سلول‌های SKOV-3‎ در حضور Pectasol-C Modified citrus pectin (Pect-MCP‎) به عنوان یک مهارکننده رقابتی بوده است. بررسی بیان Gal-3‎ با RT-PCR‎ انجام شد. Transwell‎های پوشیده شده با ماتریژل و تست ترمیم زخم به ترتیب برای بررسی تهاجم و مهاجرت به کاربرده شدند. بطور خلاصه سلول‌ها با %‎0.1‎ و %‎0.5‎ از Pect-MCP‎ تیمارشده و پس از ‎24‎ ساعت با کریستال ویوله رنگ آمیزی و بررسی کمی صورت گرفت. برای تست چسبندگی وابسته به سوبسترا، سلول‌ها از قبل برای ‎16‎ ساعت با Pect-MCP‎ تیمارشده و ‎25.000‎ سلول در هر چاهک پوشیده شده با ماتریژل ریخته شد. درصد سلول های چسبیده بعد از زمان‌های ‎15‎ و ‎30‎ دقیقه و ‎1‎ ساعت بررسی شد. درصد پهن شدن سلولی (spreading‎) نیز بعد از زمان ‎3‎ساعت بررسی شد. میزان و فعالیت ژلاتینازها توسط زایموگرافی ژلاتین مورد بررسی قرار گرفت. تست تشکیل کلنی هم برای بررسی توانایی تک سلول برای ایجاد کلنی به کاربرده شد. مطالعه اخیر نشان داد که سلول‌های تیمار شده با %‎0.1‎ از Pect-MCP‎ به میزان ‎2‎ برابر افزایش مهاجرت (P0.001‎) و به میزان %‎60‎ کاهش تهاجم نسبت به کنترل را نشان دادند (P0.001‎). در حالیکه سلول های تیمار شده با غلظت‌های بالاتر %Pect MCP (0.5‎) تعداد سلول‌های مهاجرت یافته به %‎50‎ کاهش (P0.05‎) و افزایش تهاجم ‎2‎ برابری نسبت به کنترل از خود نشان دادند (P0.001‎). به علاوه چسبندگی سلولی و پهن شدن سلولی نسبت به حالت کنترل کاهش پیدا کرده است (P0.05‎). به دنبال آن زایموگرافی ژلاتین نیز افزایش ‎2‎برابری سطح MMP-9(pro-MMP-9+ active MMP-9‎) را در سلولهای تیمارشده نسبت به کنترل با غلظت %‎0.5‎ از Pect-MCP‎ را نشان داد. در نهایت Pect-MCP‎ در غلظت های %‎0.5‎ و %‎0.1‎ ایجاد و رشد کلنی را به شدت مهارکرده است. در نتیجه داده‌های ما نشان می‌دهد که Gal-3‎ میتواند در چسبندگی، مهاجرت و تهاجم سلول‌های سرطان تخمدان در حالت وابسته به غلظت نقش داشته باشد. این نتایج نقش کلیدی Gal-3‎ را در پیشبرد سرطان تخمدان پیشنهاد می‌دهد.
    Abstract
    Galectins are a group of proteins that bind ?-galactosides through evolutionarily conserved sequence elements of the carbohydrate recognition domain. Galectin-3 (Gal-3) is known for its role in tumorigenesis and progression through regulating cell proliferation, apoptosis, cell adhesion, invasion, and metastasis by binding to the N-acetyllactosamine moiety of cell surface glycoproteins or glycolipids. SKOV-3 ovarian cancer cell line is highly metastatic and expresses Gal-3 but its function in ovarian cancer remains unknown. The aim of this study was to determine the role of Gal-3 in adhesion, colony forming assay, invasion and migration of SKOV-3 cells in the presence of PectaSol-C modified citrus pectin (Pect-MCP) known as a competitive inhibitor of Gal-3 function. RT-PCR were used to show Gal-3 expression in SKOV-3. Matrigel-coated transwells and wound healing assay were used for invasion and migration assay, respectively. Briefly, cells were treated with 0.1% and 0.5% Pect-MCP, cells were stained with crystal violet and quantified after 24h. For substrate-dependent adhesion test, pre-treated cells with Pect-MCP for 16h were used, then trypsinized and seeded at 25 x 103 cells /well in matrigel coated wells. The percent of adherent cells were quantified after 15 and 30 minutes and 1h for adhesion. Percent of cell spreading was assessed after 3 hours. MMP-2, -9 activities were analyzed by gelatin zymography. Colony formation assay was used to assess the ability of single cells to form colony. The present study showed that Pect-MCP (0.1%) treated cells showed 2-fold higher number of migrated cells (P<.001) and 60% decreased number of invaded cells (P<.001) compared to control (untreated). Cells treated with higher concentration of Pect-MCP (0.5%) the number of migrated cells was decreased to 50% (P<0.05), while invasion showed 2-fold increase (P<.001) compared to control. Moreover, substrate-dependent cell adhesion and spreading were decreased compared to control (P<0.05). Subsequently, gelatin zymography showed increased levels of Pro-MMP-9 and active MMP-9 in treated cells with Pect-MCP 0.5%. In addition, Pect-MCP 0.1% and 0.5% strongly inhibit colonogic cell survival. In conclusion, our data suggests that Gal-3 is involved in adhesion, migration and invasion of ovarian cancer cells in a dose dependent manner. These results could show the key role of Gal-3 in ovarian cancer progression.