عنوان پایان‌نامه
انتقال ژن و ارزیابی مولکولی گیاهان تراریخته در خربزه رقم خاتونی
- رشته تحصیلی
- مهندسی تولیدات گیاهی- اصلاح گیاهان باغبانی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 60582;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 728
- تاریخ دفاع
- ۳۱ شهریور ۱۳۹۲
- دانشجو
- لیلی خرم روزمهربانی
- استاد راهنما
- محمود لطفی
- چکیده
- خربزه یکی از گونه های خانواده کدوییان بوده و حساس به بیماری های قارچی است. به منظور تولید خربزه تراریخته، انتقال ژن¬های کیتیناز، گلوکاناز و PR1 با روش آگروباکتریوم و سویه LBA4404 دارای پلاسمید pBI121-chi glu PR1 استفاده شدند. این پلاسمید دارای نشانگر انتخابی مقاوم به کانامایسین و دارای سه ژن ضد قارچی تحت کنترل پروموتور 35S است. این بررسی با تلقیح ریزنمونه¬های برگ لپه¬ای هفت روزه از هر دو رقم با این سویه شروع شد و پس از دو روز همکشتی در تاریکی، واکشت ریزنمونه¬ها تا رسیدن به شاخه¬زایی و اندام¬زایی بر روی محیط MS انتخابی دارای آنتی¬بیوتیک¬های کانامایسن و سفوتاکسیم ادامه یافت. نتایج نشان داد که زمان لازم برای رسیدن به گیاه کامل در رقم سمسوری به مدت 1 ماه کمتر از رقم خاتونی و فراوانی باززایی گیاهان تراریخت احتمالی برای رقم خاتونی 4% و برای رقم سمسوری7/1% و راندمان تراریختی در رقم خاتونی28/0% و در رقم سمسوری 57/0% است. تعدادی گیاه کند رشد نیز برای هر دو رقم بدست آمد. نتایج حاصل از آزمون PCR وجود حداقل یک کپی از این ژن¬ها را در ژنوم گیاهان تأیید کرد. کلمات کلیدی: بیماری¬های قارچی، کیتیناز، گلوکاناز، PR1، Cucumis melo L.
- Abstract
- Abstract Melon (Cucumis melo L.) is a species of Cucurbitaceae family and is sensitive to fungus diseases. So in order to produce transgenic melon, Chitinase, Glucanase and PR1 genes were transferred to melon (var. Khatooni and Samsouri) via Agrobacterium tumefaciens strain LBA4404 harboring pBI121-chi glu PR1 vector. This plasmid contained kanomycine resistance gene as selection marker. The selective marker gene and three fungi resistance genes were under the control of CaMV35S promoter. Inoculation of seven days cotyledonary explants from both varieties was carried out by Agrobacterium. After two days of co-cultivation in dark condition, sub-culturing of explants was done in selective MS medium containing kanamycin and cefatoxime until regeneration. The results showed that the required time to reach to adult plant was one month sooner in Samsori than Khatooni. On the other hand the regeneration frequency of candidate transformed plant in Khatooni was 4% while in Samsori it was 1.7%. So the efficiency of transformation in Khatooni was 0.28% while in Samsori it was 0.57%. Several slow growing plants were obtained for both varieties. The results of PCR verified the existence of a minimum one copy of these genes in the genome of plants. Key words: Fungi diseases, chitinase, glucanase, PR1, Cucumis melo L.
