عنوان پایان‌نامه
برسی فعالیت آنتاگونیستی و پایدار سه جدایه Pseadomonas Fhuorescens بر علیه قارچ Botrytis mahiدر بسترهای مختلف و امکان فرمو لا سیون آنها
- رشته تحصیلی
- مهندسی‌کشاورزی-بیماری‌شناسی‌گیاهی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 44704;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 347
- تاریخ دفاع
- ۱۵ مهر ۱۳۸۸
- دانشجو
- نجمه صادقی نائینی پور
- چکیده
- هدف از این پژوهش بهبود خاصیت آنتاگونیست جدایه های P8، P7 و استرین CHA0 از باکتری Pseudomonas fluorescens علیه عامل بیماری کپک خاکستری سیب، (Bottrytis mali bm2)، در شرایط آزمایشگاهی و انبار و همچنین ارزیابی ماندگاری این جدایه ها در بسترهای مختلف جهت کنترل کپک خاکستری سیب در انبار بود. جهت ارزیابی بهبود خاصیت آنتاگونیستی جدایه های باکتریایی مذکور از هفت نمک معدنی متفاوت هر کدام در سه غلظت؛ نمک های کلرید کلسیم (CaCl2.2 H2O) ، سولفات فرو متبلور (FeSO4 .7H2O)، سولفات منیزیم (MgSO4) و آمونیوم مولیبدات (H24Mo7N6O24) در غلظت های 25/1 ، 1 و 75/0 میلی مول ، نمک های سولفات روی متبلور (ZnSO4.7H2O) و سولفات مس (CuSO4) در غلظت های 1 ، 75/0 و 35/0 میلی مول و نمک کلرید کبالت متبلور (CoCl2.6H2O) در غلظت های 25/0 ،1/0و 05/0میلی مول؛ در آزمون های آزمایشگاهی و انبار ارزیابی شد. در ابتدا اثر نمک های مورد آزمون در غلظت های مورد نظر روی رشد سه جدایه باکتری در محیط براث بررسی شده که به جز نمک کلرید کبالت در غلظت های 25/0 و ا/0 میلی مول هیچکدام از نمک ها در غلظت های استفاده شده تأثیری روی رشد جدایه های باکتریایی نداشتند. در آزمون کشت متقابل نمک کلرید کلسیم با 79-70% بازدارندگی برای هر سه جدایه بهترین نمک در بهبود خاصیت آنتاگونیست جدایه های باکتریایی بود. در آزمون اثر نمک های مذکور روی تولید آنتابولیت های ثانویه جدایه های باکتری و درنتیجه بهبود خاصیت آنتاگونیستی آنها نمکهای کلرید کلسیم، سولفات مس و آمونیوم مولیبدات برای هر سه جدایه باکتریایی بیشترین کاهش وزن بیومس قارچ B.mali bm2 را موجب شدند. در ارزیابی تلفیق نمک های مورد آزمون با جدایه های باکتریایی علیه بیماری کپک خاکستری سیب در انبار در دمای 2?22 درجه سانتی گراد نیز نمک های کلرید کلسیم، آمونیوم مولیبدات و سولفات مس کمترین مساحت لکه های مربوط به بیماری را روی سیب موجب شدند. متعاقب این آزمایش ها، ماندگاری جدایه های باکتریایی در بسترهای مختلف؛ پودر تالک، سبوس گندم، سبوس برنج، نشاسته ذرت، نشاسته ذرت +روغن زیتون+ دکسترز و همچنین نشاسته ذرت+ روغن زیتون+ملاس؛ که در دو دمای 4 و 24 درجه سانتیگراد نگهداری شده بودند، به روش سری رقت ارزیابی شد. قابل ذکر است که سوسپانسیون باکتری ها به دو صورت یکبار در محیط NB و بار دیگر با محلول آلجینات سدیم به بسترها اضافه گردید. جمعیت سلول های زنده هر سه جدایه باکتریایی پس از شش ماه نگهداری در تمامی بسترها کاهش یافت، اما بهترین فرموله تهیه شده در هر دو دما و هر سه جدایه باکتری فرموله تالک بود که بهترین ماندگاری را داشت. پس از ارزیابی ماندگاری جدایه ها در بسترهای مختلف ، فرموله های تهیه شده جهت بررسی خاصیت بازدارندگی باکتری علیه بیماری کپک خاکستری سیب در انبار در دو دمای 4 و 24 درجه سانتیگراد مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد که در اغلب فرموله ها به جز فرموله سبوس گندم تأثیری روی خاصیت آنتاگونیستی سه جدایه باکتری سودوموناس نداشته و حتی در فرموله تالک برای هر سه جدایه و در هر دو دما بیشترین کاهش مساحت لکه مربوط به بیماری مشاهده شد. در این تحقیق با توجه به نتایج اثر نمک های مختلف روی خاصیت آنتاگونیستی سه جدایه، نمک های کلرید کلسیم و آمونیوم مولیبدات در غلظت 75/0 میلی مول (کمترین غلظت) و نمک سولفات مس در غلظت 35/0 میلی مول (کمترین غلظت) انتخاب و به فرموله پودر تالک که بهترین ماندگاری و بیشترین بازدارندگی را دارا بود، اضافه گردید و در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری شد. ماندگاری باکتری در فرموله تالک و تالک به همراه نمک نیز در هر ماه توسط سری رقت ارزیابی شد. جمعیت سلول های زنده باکتری در شش ماه کاهش یافته بود لیکن ماندگاری جدایه های باکتریایی در فرموله تالک بدون نمک و فرموله های تالک به همراه نمک تفاوتی نداشت، بدین معنا که نمک های افزوده در ماندگاری جدایه های باکتریایی تأثیری نداشتند. در ضمن اثر فرموله های اصلاح شده با نمک روی خاصیت آنتاگونیستی سه جدایه باکتری علیه بیماری کپک خاکستری سیب در انبار روی میوه سیب در دمای 4 درجه سانتیگراد ارزیابی شد. نتایج نشان داد که افزودن نمک ها (کلرید کلسیم، آمونیوم مولیبدات و سولفات مس) به پودر تالک خاصیت آنتاگونیستی سه جدایه را بهبود بخشید و مساحت لکه مربوط به بیماری روی سیب کاهش یافت. این نتایج پیشنهاد می کند که می توان از جدایه های P8، P7 و استرین CHA0 از باکتری P.fluorescens همراه با نمک های مذکور در فرموله تجاری تالک به صورت فرموله های تجاری اصلاح شده برای کنترل بیماری پس از برداشت کپک خاکستری سیب در انبار استفاده نمود، که مزایای زیست محیطی و سلامتی بسیاری دارد.
- Abstract
- Abstract In this study two isolates (P7 & P8) and one strain (CHA0) of Pseudomonas fluorescens and one isolate of Botrytis mali (bm2) were abtained from plant pathology lab of Abureyhan campus. We investigated the effect of seven different salts include : (NH4)Mo7O27. 4H2O, CaCl2.2H2O, FeSO4.7H2O, MgSO4 (in 3 concentrations 0.75, 1, 1.25mM), ZnSO4.7H2O, CuSO4.5H2O (in 3 concentrations 0.35, 0.75, 1 mM) and CoCl2.6H2O (in concentrations 0.05, 0.1, 0.25 mM) for biomass production of three isolates P7, P8 and CHA0 of P. fluorescens in vitro experiments. CoCl2.6H2O suppressed growth of three isolates of P. fluorescens but the other salts had no effect on growth of isolates. The effect of these salts on antagonistic activity isolates P7, P8 and CHA0 in dual culture test show that the CaCl2.2H2O was the best effect on improved biocontrol activity of p7, p8 and CHA0.In filtration test results showed that the addition of CaCl2.2H2O, CuSO4.5H2O and (NH4)Mo7O27.4H2O reduced the weight of fungal biomass in three isolates. This research indicated that incorporation CaCl2.2H2O, CuSO4.5H2O and (NH4)Mo7O27.4H2O with P. fluorescens (p7, p8 & CHA0) caused improvement of efficacy of antagonistic activity against gray mold on apple fruits in vivo. In this research we formulated two isolates and one strain (p7, p8 & CHA0) with six diferrent carriers (talc powder, powdered wheat bran, powdered rice bran, corn starch, corn starch+olive oil+molase, corn starch+olive oil+D-glucose). The bacterial suspension added to these carriers in two forms: bacterial suspension in nutrient broth culture or bacterial suspension without nutrient broth culture in Na-alginate. These formulations storaged at two tempretures 4 and 22±2?C for six months. Long-term survival of antagonistic in carriers was assessed over a period of 6 months. Bacteria could survive for six months but the numbers of bacterial cells in all three isolates decreased during six months. Survival of three isolates were higher in all carriers at 4?C than 22±2?C. The maximum population of three isolates in different carriers storaged at 4?C after six month were found in talc powder. We tested the disease control activity of these isolates in different formulation at two tempretures 4 and 22±2?C in vivo. Talc powder formulation significantly reduced decay area caused B. mali bm2 at 4 and 22±2?C. According to previous tests on the effects of different salts on biocontrol activity of P. fluorescens (p7, p8 & CHA0), CaCl2.2H2O, CuSO4.5H2O and (NH4)Mo7O27.4H2O were tested as formulation additives and added to the most effective formulation against B. mali bm2, talc powder. Long-term survival of antagonistists in talc powder formulation amended with effective salts was assessed over a period of six months. Results showed that the addition of CaCl2.2H2O, CuSO4.5H2O and (NH4)Mo7O27.4H2O to talc powder had no effect on survival of p7, p8 and CHA0.We evaluatede the disease control activity of these isolates in talc powder formulation a mended with CaCl2.2H2O, CuSO4.5H2O and (NH4)Mo7O27.4H2O on apple fruit in vivo. Results showed that formulation additives could improve the disease control activity of three isolates of P. fluorescens.
