عنوان پایان‌نامه
اثر سطوح مختلف کد آنزیم ۱۰Q و ویتامین E در رقیق کننده منی در طول سردسازی بر کیفیت اسپرم اسبچه خزر
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 5860;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 62690
- تاریخ دفاع
- ۱۶ بهمن ۱۳۹۲
- دانشجو
- ایمان یوسفیان
- استاد راهنما
- احمد زارع شحنه
- چکیده
- تلاش‌هایی برای بهبود نگه‌داری منی سرد با تغییر در رقیق‌کننده‌ها، همچنین افزودن آنتی‌اکسیدان‌ها به آن‌ها به‌منظور حفظ یک‌پارچگی غشا، جلوگیری از تنش اکسیداتیو یا حفظ جنبایی اسپرم صورت گرفته است. نتیجه‌ی این مطالعات موفقیت‌های متنوعی را در بهبود و حفظ جنبایی اسپرم یا باروری منی سرد داشته است. بنابراین،هدف از این پژوهش تعیین اثرات غلظت‌های مختلف آلفا توکوفرول و CoQ10 به‌صورت جدا و ترکیبی به عنوان آنتی‌اکسیدان بر کیفیت آزمایشگاهی اسپرم اسبچه‌خزر طی نگه‌داری به مدت 48 ساعت بود. برای انجام آزمایش، منی با استفاده از واژن مصنوعی مدل میسوری دو بار در هفته جمع آوری شد. سپس بخش ژل با استفاده از فیلتر جدا و مورد ارزیابی اولیه قرار گرفت. نمونه‌هابه نسبت 1:1 با رقیق کننده‌ی بر پایه‌ی شیر خشک بدون چربی (کنی) رقیق و بانیروی×g600 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شدند. پس از سانتریفیوژ، پلاسمای منی حذف و پلیت‌های تشکیل شده با هم مخلوط شدند. پلیت حاصل به 10 گروه مساوی تقسیم و سپس با رقیق‌کننده‌های حاوی غلظت‌های صفر (شاهدمنفی، NC)، 5 (V5) و 10(V10)میلی‌مولآلفا توکوفرول؛1میکرو‌مول(C1)و 2 میکرو‌مولCoQ10 (C2)؛ 1 میکرو‌مولCoQ10با 5 (C1V5) یا 10 (C1V10) میلی‌مولآلفا توکوفرول؛ 2 میکرو‌مولCoQ10با 5 (C2V5) یا 10 (C2V10) میلی‌مولآلفا توکوفرول؛دی متیل سولفوکساید (شاهد مثبت، به‌عنوان حلال و حاملآنتی‌اکسیدان‌ها، PC)رقیق شد، به‌طوری‌که غلظت نهایی 106×50 اسپرم در هر میلی‌لیتر بدست آید. جنبایی و سایر خصوصیات جنبایی، زنده‌مانی، یک‌پارچگی غشا، ناهنجاری کل و پراکسیداسیون لیپیدی نمونه‌های کهدر دمای 5 درجه سانتی‌گراد در یخچال نگه‌داری شده بودند، در زمان‌های 0 (تازه)، 6، 24 و 48 ارزیابی شد.در زمان 48 جنبایی کل در تیمارهای C1و C1V5(به ترتیب 82/3±44/62و82/3±90/67 درصد) نسبت به تیمارهای NC،C2 و C2V5(به‌ترتیب 82/3±27/51، 82/3±58/51 و 82/3±52/49 درصد) به‌طور معنی‌داری بیشتر بود (05/0P<).جنبایی پیش‌رونده در زمان 48در تیمارC1V5(87/3±92/39 درصد) به‌طور معنی‌داری نسبت به تیمارهای NC، PC،V10و C2V10 (به‌ترتیب 87/3±70/28، 87/3±98/27 و 87/3±02/26 درصد) بیشتر بود (05/0P<).فراسنجه‌های کنتیکی اسپرم بین تیمارها با هم تفاوت معنی‌داری نشان نداد(05/0P>).زنده‌مانی طی زمان 48 در تیمارهای حاوی V5، C1وC1V5(به‌ترتیب 63/3±89/65، 63/3±16/65 و 63/3±34/70 درصد) به‌طور معنی‌داری نسبت به تیمارهای NC وC2V10(به‌ترتیب 63/3±44/54 و 63/3±70/53 درصد)بیشتر بود (05/0P<).در زمان 48 یک‌پارچگی غشای پلاسمایی در تیمار حاوی C1V5 (75/3±10/51 درصد) نسبت به تیمارهای NC، PC، V10، C2 و C2V10 (به‌ترتیب75/3±87/38، 75/3±82/37، 75/3±38/40، 75/3±80/39 و 75/3±46/37 درصد) به‌طور معنی‌داری بیشتر بود (05/0P<).پراکسیداسیون لیپید در زمان 48 در تیمار حاوی C1V5(50/0±94/2نانو مول/میلی لیتر) نسبت به تیمارهای NCو C2V10 (به‌ترتیب 50/0±42/4 و 50/0±39/4نانو مول/میلی لیتر) به‌طور معنی‌داری کمتر بود (05/0P<). در نتیجه با انجام این ارزیابی‌ها، به‌نظر می‌رسد که رقیق‌کننده‌ی حاوی 1 میکرو‌مول CoQ10با 5 میلی‌مول آلفا توکوفرول به‌صورت ترکیبی، طی فرایند سردسازی اسپرم نریان تا دمای 5 درجه‌ی سانتی‌گراد عملکرد بهتری داشته باشد.
- Abstract
- Preservation of liquid semen at 5°C is an important technique in the breeding management of horses Oxidative damage to spermatozoa during storage is a potential cause of the decline in sperm quality during hypothermic storage of liquid semen. So, we investigated theeffect of Coenzyme Q10 (CoQ10; C) and ?-tocopherol (V) along with their intraction effects as antioxidant during cooled storage of Caspian stallion spermatozoa. Semen was obtained from three mature Caspian horses. A total of 5 ejaculates per stallion were collected during this experiment at twice a week basis by using a Missouri model artificial vagina.After collection, ejaculate was filteredthroughsterile gauzeto eliminate the gel fraction. The three ejaculates were each time (n = 3; r=5) pooled and extended at a 1:1ratio with a non-fat dried skim milk(NFDSM) extender.Diluted semen was centrifuged with 600 × g for 10 minute at room temperature.After centrifugation, most (?90%) supernatant (seminal plasma) is removed; a sperm-rich pellet was divided in ten aliquots.Each sperm aliquot was diluted with a NFDSM in order to achieve concentration of 50 × 106 spermatozoa/ml, that was supplemented with various concentration of antioxidants in the following: without antioxidants (Negative Control; NC), without antioxidants + 0.9% dimethyl sulfoxide (as antioxidantsvehicle; Positive Control; PC), 5mM VitE(V5), 10mM VitE(V10), 1µM CoQ10(C1), 2µM CoQ10(C2), 1µM CoQ10 + 5mM VitE (C1V5), 1µM CoQ10 + 10 mM Vit E (C1V10), 2µM CoQ10 + 5mM Vit E (C2V5) and 2µM CoQ10 + 10mM Vit E(C2V10). Then, treatments were placed in a 5°C refrigerator.For evaluation,treatments were re-warmed for 10 minute to 37oC, then motility, viability, plasma membrane integrity, morphological abnormalities and lipid peroxidation were assessed for each sampleto determine in vitro sperm quality at 0 (fresh), 6, 24 and 48 h.The results showed that total and progressive motility were significantly higher in C1V5compared to NC and C2V10treatments during the 48h storage (P<0.05). Also, over 48 h storage, total motility was significantly higher in C1 than NC and C2V10 treatments(P<0.05). In addition, sperm motion parameters (VAP, VSL, VCL, BCF, LIN and STR) not showed significant difference among all treatments (P>0.05). Percentage of plasma membrane integrity was significantly higher in C1V5 than other group except V5, C1and C2V5treatments (P<0.05). The extender contains V5, C1 and C1V5significantly higherpercentage of viable spermatozoa in compare with NC and C2V10treatments (P<0.05). There were no significant differences for
