عنوان پایان‌نامه
جداسازی سلول های بنیادی از بند ناف انسان، نشاندارسازی با ۹۹mTC , و تمایز آن ها به سلول های پوستی بر روی داربست سلولزی
- رشته تحصیلی
- مهندسی بافت
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 62790;کتابخانه دانشکده علوم و فنون نوین شماره ثبت: 44
- تاریخ دفاع
- ۱۴ بهمن ۱۳۹۲
- دانشجو
- ساره ابوالحسنی
- استاد راهنما
- جواد محمد نژاد آروق
- چکیده
- مهندسی بافت یک بخش در حال پیشرفت در مهندسی پزشکی با هدف ترمیم و جایگزینی بافت¬های آسیب دیده است. در این میان، ترمیم بافت پوست از این جهت که پوست بزرگترین عضو بدن است و عملکرد اولیه¬ی آن ایجاد یک سد دفاعی در برابر محیط اطراف است، اهمیت می یابد. از دست رفتن تمامیت و یک پارچگی بخش¬های بزرگی از پوست به دلیل جراحت یا بیماری، ممکن است منجر به ناتوانی¬های شدید یا حتی مرگ شود. درمان پزشکی که اخیرا استفاده می شود، به کار گیری زیست مواد پلیمری و سلول¬های بنیادی همراه با یکدیگر است. هدف این مطالعه بررسی جداسازی سلول¬های بنیادی از خون بند ناف و تمایز این سلول¬ها به سلول¬های پوستی و کشت سلول¬های تمایز یافته روی فیلم سلولزی است. بدین منظور ابتدا سلول¬های بنیادی مزانشیمال خون بند ناف انسان (hUcbMSCs) با استفاده از روش ایجاد شیب غلظتی جدا شدند. سپس به منظور اثبات بنیادی بودن سلول¬های جدا شده، از تمایز این سلول¬ها به رده¬های مزانشیمال مثل چربی و استخوان استفاده گردید و همچنین آنالیز فلوسایتومتری با بررسی شاخص¬های سلولی CD34 و CD38 انجام گردید. سپس این سلول¬ها با استفاده از تکنسیوم 99m (99mTC)نشاندار شده و درصد پایداری با استفاده از دستگاه gamma counter اندازه گیری شد. سپس به بررسی یافتن میزان مواد و مدت زمان مناسب جهت القای تمایز این سلول¬ها به سلول¬های پوستی پرداخته شده است. سلول¬های بنیادی جدا شده با استفاده از محیط القایی مناسب تمایز به مدت 20 روز تیمار گشتند. در مرحله بعد، تمایز پوستی این سلول¬ها با استفاده از آنالیز PCR و بیان ژن cytokeratin 18 اثبات گردید. در پایان تعامل میان سلول¬های کراتینوسایت با فیلم سلولزی و همچنین تعامل میان سلول¬های hMSC با این فیلم با استفاده از تصاویر میکروسکوپ الکترونی SEM بررسی شد.
- Abstract
- Tissue engineering is a progressive part in medical engineering with the aim of repairing and replacing of damaged tissues. As skin is the largest organ in our body and its primary function is protecting against surrounding environment, its repairing is very important. Loss of integrity of the skin due to injury or disease may lead to severe disability or even death. Medical treatments currently used are applying a polymeric biomaterials and stem cells together. The aim of this study is to isolate stem cells from umbilical cord blood and differentiating them into skin cells and culturing them on cellulose film. For this purpose, first human umbilical cord blood mesenchymal stem cells (hUcbMSCs) were separated using density gradient. Then to prove that isolated cells are stem cells, the differentiation of these cells into adipocytes and osteocytes were used, also flowcytometric analysis was performed to investigate the expression of CD34 and CD38 markers. Then the isolated cells were labeled using technetium 99m (99mTC) and the percentage of stability was measured using a gamma counter. At the next stage investigating of the appropriate time and materials for inducing differentiation of these cells into skin cells is done. Isolated stem cells by using the appropriate induction medium were treated for 20 days. Then, the differentiation into skin cells was confirmed by using PCR technique and the expression of cytokeratin 18. At the end, culture of keratinocytes and stem cells on cellulose film was studied using electron microscopy SEM. Keywords: umbilical cord blood stem cells, keratinocytes, cellulose film
