عنوان پایان‌نامه
ارزیابی مولکولی و تحمل به تنش های شوری و اسمزی گردوهای تراریخته دارای ژن fld
- رشته تحصیلی
- مهندسی تولیدات گیاهی- اصلاح گیاهان باغبانی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 893;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 68313
- تاریخ دفاع
- ۳۰ بهمن ۱۳۹۲
- دانشجو
- منصوره نظری
- استاد راهنما
- کورش وحدتی
- چکیده
- چکیده تنش‌های محیطی مهم‌ترین عوامل کاهش‌دهنده عملکرد محصولات کشاورزی در سطح جهان هستند. در میکروارگانیسم¬های فتوسنتز کننده در پی کاهش نامطلوب فردوکسین تحت شرایط تنش، یک سلسله ناقل‌های الکترونی با عملکرد مشابه فردوکسین بیان می‌شوند. این ناقل¬های الکترونی فلاودوکسین (fld) نام دارند. ژن کنترل کننده¬ی این ناقل اختلالات ناشی از تنش¬های غیر زیستی در نقل و انتقال الکترون در سامانه فتوسنتز را کاهش می¬دهد. در این مطالعه از گیاهان گردو (Juglans regia L.) تراریخته دارای ژن fld استفاده شد. واکنش زنجیره¬ای پلیمراز نشان داد گیاهان تراریخته در مقایسه با شاهد حداقل یک نسخه از ژن هدف را در ژنوم دارا هستند. این گیاهان یک قطعه 495جفت بازی از ژن fld را تکثیر کردند. از بین 11 لاین موجود، هفت لاین این قطعه را تکثیر کردند. همچنین در واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با آغازگرهای ژن¬های Vir مشخص شد که از بین این 7 لاین تنها دو لاین 2 و 3 آلوده به ژن¬های Vir بودند. آزمایش دات بلات این لاین¬ها نیز تلفیق ژن در کروموزوم لاین-های تراریخته را اثبات کرد. به منظور بررسی تحمل به تنش¬های شوری و اسمزی گیاهچه¬های تراریخت، دو آزمایش فاکتوریل بر پایه طرح کاملاً تصادفی با چهار تکرار اجرا شد که در آن¬ها گیاهان تراریخت در سطوح مختلف NaCl (0، 100، 200 میلی مولار) و PEG (0، 10 و 12 درصد) در سه زمان متفاوت باهم مقایسه شدند. نتایج مقایسه میانگین نشان داد که لاین¬های 4، 13 و 17 در مقایسه با شاهد از تحمل بالاتری نسبت به تنش 200 میلی مولار NaCl و PEG 12% برخوردار بودند. این لاین¬ها توانستند بیش از 50 روز در تنش خشکی بدون واکشت و 35 روز در تنش شوری با یکبار واکشت رشد کنند. لاینهای تراریخت حاصله در شرایط درون شیشه ای نگهداری شدند. کلمات کلیدی: تنش¬های غیر زیستی، فلاودوکسین، Juglans regia L. ، PCR، دات بلات.
- Abstract
- Abstract Abiotic stresses are the most important factors in reducing yield of crops worldwide. Ferredoxin level decreases under adverse environmental conditions in many microorganisms. In photosynthetic microorganisms ferredoxin can efficiently be replaced by flavoprotein (flavodoxin) as an alternative electron carrier. This gene decreases disorders of abiotic stresses in the electron transfer processes of photosynthesis. In this study transgenic Persian walnut (Juglans regia L.) plants expressing fld were used. PCR result confirmed that transgenic plants had at least one copy of the gene. A 495 bp fragment of fld gene was amplified in these plants. In seven out of eleven lines this fragment was amplified. PCR with Vir genes primers indicated that two lines were inoculated by bacteria. Also dot blot experiment confirmed the presence of this gene in these lines. To evaluate salinity and osmotic stress tolerance of transgenic plants of Persian walnut, two factorial experiments were carried out based on CRD with four replications. The transgenic and non transgenic plants were placed under to three salinity (0, 100, 200 mM NaCl) and three osmotic (0, 10, 12% PEG) stress levels. Comparison among different treatments was carried out at three separate times. Transgenic plants showed better performance in the presence of NaCl and PEG. Lines of 4, 13, and 17 were better in comparison with normal lines under stress condition. These lines grew 50 days under drought stress without subculture and 35 days in salinity stress with one subculture. Transgenic plants are grown in vitro. Key words: Abiotic stress, flavodoxin, Juglans regia L., PCR, dot blot
