عنوان پایان‌نامه
اثر عصاره کلم بروکلی ودوکسوروبیسین رویمورفولوژی .سلول وآپوتوز در دودمان سلولی سرطان پروستات انسانی (LNeap)
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم جانوری -فیزیولوژی جانوری
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 4952;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 56622
- تاریخ دفاع
- ۲۷ دی ۱۳۹۱
- دانشجو
- مریم پیرانی
- استاد راهنما
- حوری سپهری
- چکیده
- کلم بروکلی یکی از اعضای خانواده کروسیفروس است که دارای سطح بالایی از فراورده ای به نام سولفارافان می باشد. مطالعات نشان داده است که، سولفارافان باعث القای آپوپتوز و توقف چرخه سلولی در سلول های سرطانی میصگردد. در تحقیق حاضر اثر همزمان عصاره کلم بروکلی (با ماده مؤثره سولفارافان) و داروی شیمی درمانی، دوکسوروبیسین، به منظور افزایش کارآمدی دارو و کاهش اثرات جانبی سمی بر روی سلول های طبیعی، مورد بررسی قرار گرفته است. سلول های سرطان پروستات انسانی LNCaP در محیط کشت RPMI1640 با %10 سرم جنین گاو (FBS) کشت داده شدند و سپس با محیط حاوی مقادیر مختلف عصاره کلم بروکلی (%4 ،3 ،2 ،1 ،0/5 ،0/25) و دوکسوروبیسین (ng/ml 500 ،100،250 ،50 ،25 ،10) و ترکیب همزمان این دو ماده، در زمان 24 ساعت انکوبه، شدند. درصد زیستایی سلولصها با استفاده از تست MTT ارزیابی شد که، در یک حالت وابسته به دوز کاهش درصد زیستایی را با عصاره کلم بروکلی و دوکسوروبیسین به تنهایی و اثر همزمان هر دو ماده نشان داد. در ضمن میزان القای آپوپتوز در این سلول ها با استفاده از رنگ آمیزی اتیدیوم بروماید/ آکریدین اورنج (ET/AO) و مطالعه بوسیله میکروسکوپ فلورسنت مورد بررسی قرار گرفت. سپس تأثیر این مواد بر چرخه سلولی با استفاده از روش فلوسایتومتری و رنگ آمیزی با پروپودیوم آیوداید مورد مطالعه قرار گرفت. بطور کلی تست MTT و رنگ آمیزی ET/AO نشان داد، ترکیب تراکم بی اثر دوکسوروبیسین (ng/ml 25) با تراکم مؤثر عصاره کلم بروکلی (%2)، در زمان 24 ساعت، باعث کاهش درصد زیستایی سلول ها (%49) و در ضمن القای آپوپتوز (%28) در حد معنی داری نسبت به گروه کنترل شد. در ضمن، نتایج بررسی های فلوسایتومتری روی چرخه سلول های LNCap پس از تیمار با تراکم های مذکور (ng/ml 25dox و %2 عصاره)، افزایش درصد فاز Sub G1 در حد معنی دار نسبت به گروه کنترل را نشان داد که، بیانگر افزایش میزان القای آپوپتوز در این سلول ها می باشد. بنابراین مصرف همزمان دوکسوروبیسین و عصاره کلم بروکلی، و یا ماده مؤثره آن یعنی سولفارافان، می تواند در کاهش دوز مصرفی دوکسوروبیسین مؤثر باشد و از این طریق باعث کاهش اثرات جانبی این داروی شیمی درمانی گردد. کلمات کلیدی: عصاره کلم بروکلی، دوکسوروبیسین، سولفارافان، آپوپتوز، سرطان
- Abstract
- Broccoli is one of the member of brassicacea family which has high level of a product called sulforaphane. It has been shown that, sulforaphane, not only induces carcinogen-detoxifying enzymes but also activates apoptosis and blocks cell cycle progression. In the present study, combination of broccoli extract and doxorubicin, in order to reduce doxorubicin administrated dose and its side effects, is under investigation. We cultured human prostate cancer cell line LNCaP in RPMI1640 media with 10% FBS and the cells were treated with deferent concentration of broccoli extract (0.25, 0.5, 1, 2, 3, 4%), doxorubicin (10, 25, 50, 250, 100, 500 ng/ml) and the combination of these two compounds for 24 hours. The viability of LNCaP cells was determined by MTT assay which showed reduction in viable cells after treatment with broccoli extract and doxorubicin in a dose dependent manner. In addition, the apoptosis induction in LNCaP cells was measured with ethidium bromide and acridine orange (ET/AO) dye and fluorescent microscopy. We also studied DNA content of LNcap cells by flow cytometry of propidium iodide stained cells which showed cell cycle changes of the cells after treatments. Our results showed that deferent concentrations of broccoli extract and doxorubicin can induce apoptosis in LNCaP cells in a dose dependent manner, as well. Interestingly, it was demonstrated that combination of effective dose of broccoli extract (2%) with ineffective dose of doxorubicin (25ng/ml) showed significant induction of apoptosis and also reduction of viability. As a result, we can propose that combination of broccoli extract and doxorubicin causes significant decrease of doxorubicin administrated dose. So, using broccoli extract or its effective agent, sulforaphane, as an herbal derivative in combination with doxorubicin reduces its administrated dose and also the side effect of this chemical drug. Keywords: Boroccoli extract, Doxorubicin, sulforaphane, apoptosis, prostate cancer
