عنوان پایان‌نامه

بررسی ترکیبات فنلی و فعالیت پلی فنل اکسیدازها در ارتباط با خواب و بیداری در بنه های زعفران زروعی



    دانشجو در تاریخ ۱۹ مهر ۱۳۸۸ ، به راهنمایی ، پایان نامه با عنوان "بررسی ترکیبات فنلی و فعالیت پلی فنل اکسیدازها در ارتباط با خواب و بیداری در بنه های زعفران زروعی" را دفاع نموده است.


    رشته تحصیلی
    زیست‌ شناسی‌-علوم گیاهی- فیزیولوژی گیاهی
    مقطع تحصیلی
    کارشناسی ارشد
    محل دفاع
    کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 3852;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 42280
    تاریخ دفاع
    ۱۹ مهر ۱۳۸۸
    دانشجو
    ناردانا اسمعیلی
    چکیده
    لینک فایل چکیده
    چکیده: زعفران گیاهی تک لپه از تیره Iridaceae است که از طریق بنه در زیر خاک تکثیر می شود. این گیاه بومی ایران بوده و دارای دو مرحله خواب و بیداری در چرخه زندگی خود می باشد که در این مراحل ویژگی های فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی متفاوتی را از خود نشان می دهد. ترکیبات فنلی یک گروه از ترکیبات ثانوی در گیاهان هستند که به دلیل خواص پاد اکسایشی، ضد میکروبی و دارویی خود، مورد توجه بسیاری از محققان قرار دارند. ترکیبات فنلی شامل فنل های ساده، فنلیک اسیدها، کومارین ها، تانن ها و فلاونوئیدها می باشند. گیاه زعفران به دلیل اثرات دارویی فراوان، در طب سنتی به طور گسترده مورد استفاده قرار می گرفته است و در حال حاضر تحقیقات فراوانی بر روی آن در دست انجام است. استخراج فنل ها توسط متانول 80% صورت گرفت و میزان کل این ترکیبات توسط معرف فولن سیوکالتو و سدیم کربنات اشباع به روش اسپکتروفوتومتری تعیین گردید. جهت شناسایی ترکیبات فنلی موجود در بنه از دستگاه GC-MS استفاده شد. برای این کار نمونه ها در حضور BHT و توسط کلریدریک اسید هیدرولیز و با متانول استخراج گردید. سپس توسط MSTFA+1%TMIS مشتق سازی شده و به دستگاه GC-MS تزریق شد. مطالعاتGC-MS هم وجود ترکیبات فنلی از جمله گالیک اسید ، p هیدروکسی بنزوئیک اسید، p کوماریک اسید، سالسیلیک اسید، سینامیک اسید، وانیلین، ترانس فرولیک اسید، سیرنژیک اسید و کافئیک اسید را تایید کرد. نتایج سنجش میزان ترکیبات فنلی کل به روش اسپکتروفتومتر در کنار آنالیز رنگ نگاری گازی- طیف سنجی جرمی نشان داد که میزان ترکیبات فنلی در اواخر دوره بیداری بیشتر از دوره خواب است. در تحقیق دیگری پلی فنل اکسیداز به روش رنگ نگاری تعویض یونی، خالص سازی نسبی گردید. سپس عصاره از نظر میزان پروتئین و زیمایه بررسی گردید و در مطالعات سینتیکی فعالیت زیمایه در غلظت های مختلفی از گهرمایه اندازه گیری شد. در مطالعات SDS-PAGE و PAGE دو نوار پروتئینی و دونوار زیمایه ای بدست آمد که دلیلی بر وجود دو ایزوفرم از زیمایه است. مطالعات سینتیکی اشباع هم تنها یک جایگاه زیمایه ای را برای اتصال گهرمایه پیروگالل نشان داد. فعالیت پلی فنل اکسیداز در دوره خواب بیشتر از دوره بیداری است که با غلظت ترکیبات فنلی کل رابطه ای معکوس دارد. در مطالعه های سینتیک اشباع هم افت شدید فعالیت با افزایش غلظت گهرمایه دیده می شود که مربوط به مهار زیمایه توسط گهرمایه می باشد. کلمات کلیدی: زعفران، بنه، ترکیبات فنلی، رنگ نگاری لایه نازک، GC-MS،رنگ نگاری تعویض یونی، پلی فنل اکسیداز
    Abstract
    Abstract Crocus sativus is a monocot plant of Iridaceae family that proliferates via its corms under ground. This plant is endemic in Iran & it has two stages in its life cycle which have different physiological & biochemical properties. The phenolic compounds are one group of secondary metabolites in plants that interested because of their antioxidant, antimicrobial & medicinal properties. They include mainly simple phenols, phenolic acids, coumarins, tannins & flavonoids. Natural antioxidants such as flavonoids are associated with a reduced risk of cancer, chronic inflammation & cardiovascular disease. Because of pharmaceutical properties, saffron was used extremely in traditional medicine & recently many investigations have been done. Phenolics extracted by 80% methanol and the total phenolics have been determined by Folin-Ciucaltue reagent & saturated sodium carbonate solution. For detection of different phenolic groups we used TLC method & different reagents for emerge the spots. Flavonoids determined by aluminium chloride & sodium acetate & for phenolic acids we used the Arnone reagent. For detection phenolic compounds in corms, we used GC-MS, that the extract were hydrolyzed in presence of BHT & HCl & hydrolysate extracted by methanol & then injected to GC-MS after derivatization by MSTFA+ 1% TMIS.The quantitative results have been shown the higher concentration of total phenolics & flavonoids in waking than dormant corms but phenolic acids concentration were higher in dormant corms. By GC-MS analysis we have determined some phenolics in saffron corms such as Gallic acid, p-Hydroxy benzoic acid, Caffeic acid, p- Coumaric acid, Salicylic acid, Cinnamic acid, Vanillin, trans Ferulic acid, Syringic acid. Thus because of high content of phenolics in waking corms, we suggest that more medicinal investigations on this plant. In another work we used Ion-exchange chromatography to partial purification of polyphenol oxidase enzyme. Then PPO extracts analyzed quantitatively by spectrophotometry and qualitatively by PAGE electrophoresis. To the end kinetic measurements were done according to different substrate concentrations. As a notable result, distinctive differences were seen between polyphenol oxidase activity in waking and dormant saffron corms (high activity in dormant saffron corms). By PAGE and SDS-PAGE studies we founded two isoforms of PPO and kinetic saturation curves revealed just one active site in polyphenol oxidase enzyme. Key words: Saffron, Corms, Phenolic compounds, TLC, GC-MS, Polyphenol oxidase, Ion- Exchange Chromatography.