عنوان پایان‌نامه
خالص سازی و مطالعه پایداری زیر واحد R۲ ریبونوکلئوتید ردوکتاز موش
- رشته تحصیلی
- بیوفیزیک
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 11066ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 55208
- تاریخ دفاع
- ۲۸ شهریور ۱۳۹۱
- دانشجو
- علی رشیدنیا
- استاد راهنما
- علی اکبر صبوری
- چکیده
- پروتئین زیر واحد کوچک ریبونوکلئوتید ردوکتاز موش (RNR-R2) توسط ستون دی‌اتیل‌آمینواتیل (DEAE) سفارز خالص سازی شد. تغییرات ساختار دوم پروتئین R2 در 3=pH نسبت به 7=pH که ساختار پروتئین در آن طبیعی است، ناچیز است، اما این تغییرات در pHهای دیگر بیشتر است. همچنین، تغییرات نشر فلوروسانس ذاتی در 3=pH به شدت تغییر می کند که این بیانگر یک تغییر شدید در ساختار سوم است. تغییرات مشاهده شده می تواند دلیلی بر وجود یک ساختار حدواسط به نام مولتن گلبول در 3=pH باشد. از غیر طبیعی شدن پروتئین بوسیله گوانیدین هیدروکلراید، نمودارهای دو فازی به دست آمد که این مربوط به حدواسط دایمر در مسیر غیر طبیعی شدن پروتئین می باشد. غیرطبیعی شدن پروتئین R2 بوسیله دودسیل تری متیل آمونیوم بروماید(DTAB) نیز از مکانیسم سه وضعیتی پیروی می کند، اگر چه در ظاهر مکانیسم دو وضعیتی به نظر می رسد. نتایج به دست آمده از منطبق کردن نمودارهای DTAB نشان می داد که بهترین تطبیق مربوط به مکانیسم سه وضعیتی با حدواسط دایمر است. همچنین اثر DTABدر pH های مختلف حاکی از آن است که اثرDTAB در pH های بازی نسبت به اسیدی بیشتر است. نتایج غیر طبیعی شدن حرارتی نیز حاکی از وجود حدواسط دایمر در طی غیر طبیعی شدن می باشد. با توجه به اینکه این پروتئین در مقابل غیر طبیعی کننده‌های مختلف حدواسط دایمر تشکیل می دهد پس می توان نتیجه گرفت که پیوندهای بین دو زیر واحد از پیوندهای درون هر زیر واحد قویتر است.
- Abstract
- In this study, the mouse R2 protein was purified by diethyl amino ethyl (DEAE) chromatography. Second structure of mouse R2 were almost unchanged in pH 3 with respect to native forms (pH7), suggesting that these intermediates retain high content of native – like secondary structure despite the remarkable loss of tertiary structure content in pH 3. These results propose a partially folded state known as molten globular like state for this protein in pH 3. The study of unfolding mouse R2 by Guanidine HCl showed that unfolding curves is obviously biphasic and Global analysis suggests that mouse R2 unfold via a dimeric intermediate. Mechanism of R2 protein denaturation by dodecyl trimethyl ammonium bromide (DTAB) also follow three-states although appears to be two-states mechanism. The results showed that the best fit of DTAB curves related to the three – states mechanism by dimeric intermediate. Thermal denaturation results also indicate that there was an dimeric intermediate during denaturation. According to the formation of dimeric intermediate of protein versus different denaturant, we can conclude that the binding affinity between inter – subuint is greater than intra – subunit.
