عنوان پایان‌نامه
بررسی ویژگیهای مرفومتریک و مولکولی گونه های اوسترتاژ با استفاده از توالی ITS۲
- رشته تحصیلی
- انگل شناسی دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 19 ارشد;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 54568;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 19 ارشد
- تاریخ دفاع
- ۳۰ شهریور ۱۳۹۱
- دانشجو
- میثم صبوردربندی
- استاد راهنما
- بهنام مشگی
- چکیده
- بررسی حاضر با هدف تشخیص گونه های شایع اوسترتاژیا در ایران بر اساس ویژگی های ریخت-شناسی و تعیین مشخصات مولکولی مبتنی بر rDNA و ترادف ژن ITS2 (همچنین ITS1 و 5.8s) انجام گرفت. گونه های اوسترتاژیا (تلادورساژیا) عامل اصلی گاستریت انگلی دام های از نوع نشخوارکننده هستند که به دلیل ایجاد تغییر در ساختار، PH و عملکرد شیردان با ایجاد اختلال در هضم آنزیمی مواد غذایی بویژه پروتئین ها، سبب کاهش تولید شیر، پشم و وزن دام می گردد در نتیجه خسارت فراوانی به اقتصاد دامپروری وارد می سازند، لذا بررسی جنبه های مختلف این نماتود لوله گوارش از ضرورت های تحقیقاتی در انگل شناسی دامپزشکی محسوب می شود. در شروع پژوهش پس از مراجعه به کشتارگاه های شهر ری، تهران، مشهد و بندرعباس، در ضمن بازرسی کشتارگاهی نمونه های مورد نظر جمع آوری گردید. در این تحقیق تعداد 60 عدد کرم بالغ از سه گونه اوسترتاژیا سیرکومسینکتا، اوسترتاژیا اکسیدانتالیس و اوسترتاژیا تریفورکاتا جهت ارزیابی مورفومتریک اسپیکول ها از دو میزبان گوسفند و بز، براساس کلید تشخیص شناسایی و جدا شد. در این مورد اساس تشخیص کرم های نر بودند. ضمن مشاهده میکروسکوپی، شکل و طول هر اسپیکول کرم نر با روش های متریک و ترسیمی تعیین گردید. در بررسی مولکولی تشخیص سه گونه مذکور با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز و توسط پرایمرهای اختصاصی به منظور تکثیر توالی کامل لکوس ITS2 صورت پذیرفت. محصول PCR پس از خالص سازی، تعیین توالی گردید و ترادف های به دست آمده با استفاده از نرم افزارChromas (version2.1) و بدنبال آن ابزار BLAST مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. در اوسترتاژیا سیرکومسینکتا میانگین طول اسپیکول ها 8/388و 7/382 میکرون بود، اسپیکول ها در انتها دو شاخه، نازک، کشیده، به رنگ قهوه ای و در انتهای شاخه اصلی تکمه ای وجود داشت، نزدیک به انتهای شاخه اصلی نیز شاخه نازک و نوک تیزی مانند مشاهده شد. نتایج PCR با توجه به وجود باند 946 جفت باز قابل شناسایی بود. نتیجه تعیین توالی لکوس ITS2 در اوسترتاژیا سیرکومسینکتا در قیاس با اطلاعات مربوط در بانک جهانی ژن تشابه کامل (100 درصد) را با نمونه های ثبت شده نشان داد. اگر چه اندازه اسپیکول های این گونه در جدایه بز اندکی بزرگتر از اندازه اسپیکول ها در اطلاعات موجود در دنیاست اما نتایج بررسی مولکولی تشابه 100 درصد را نشان داد. در اوسترتاژیا اکسیدانتالیس متوسط اندازه اسپیکول ها 7/321 و /311 میکرون بود. اسپیکول ها ضخیم، قهوه ای پررنگ و هر یک در انتها به سه شاخه پهن تقسیم شده اند. گوبرناکولوم پیکانی شکل قابل مشاهده بود. توالی نوکلئوتیدی این گونه با گونه قبل 92 درصد و با مارشالاجیا مارشالی 99 درصد تشابه داشت. در اوسترتاژیا تریفورکاتا میانگین اندازه اسپیکول ها 7/227 و 5/222 میکرون بود، اسپیکول ها به رنگ قهوه ای و نسبتا ضخیم که در انتها به سه شاخه تقسیم شده اند، انتهای شاخه طویل تر تکمه ضخیمی وجود دارد و قبل از آن دو شاخه نازک قابل رویت می باشد. قابل ذکر است که در مورد دو گونه اخیر در بانک جهانی ژن هیچگونه اطلاعاتی ثبت شده ای وجود ندارد. توالی نوکلئوتیدی به دست آمده در اوسترتاژیا تریفورکاتا تشابه بسیار نزدیک (98 درصد) را با توالی مربوط به اوسترتاژیا سیرکومسینکتا و مارشالاجیا مارشالی (92 درصد) نشان داد. پژوهش حاضر نشان می دهد، اگر چه خصوصیات ریختی در تفریق گونه¬های اوسترتاژیا قابل استفاده اند ولی با توجه به ویژگی های مولکولی مبتنی بر ITS2 –rDNA و ترادف های نوکلئوتیدی به دست آمده اختلاف بسیار ناچیزی بین آنها وجود دارد، لذا بمنظور انجام بررسی های تکمیلی و مطالعات آتی، سایر لکوس های ژنی، بخصوص ژن های میتوکندریایی با در نظر گرفتن خصوصیات میزبانی و شرایط متغیر اقلیمی پیشنهاد می گردد.
- Abstract
- Ostertagia spp. (Nematod : Trichostrongylida), commonly known as the brown stomach worm causes sever economic losses. The taxomolecular status of these nemadoes within the subfamily Ostertagiinae has been the focus of many studies. The persent study was carried out to identify Ostertagia circumcincta, O. occidantalis and O. trifurcata of sheep and goat isolates from Iran the based on morphomulecular characterizes, one hunder eighty adult male nematode in different species were collected from abomasa (60 samples from each animal) at slaughther houses (including : Tehran, Mashhad, Bandar Abas and Ray). Samples were morphologically identified according to the spicules morphometric measurements. Mulecular analysis was performad utilizing genomic (ITS2 – rDNA) gene marker. Findings of the present study demonstrate that the mean length of spicules was 382.7 – 388.8 micron in O.circumcincta. Two spicules are pigmented brown, thinlong and divided to two branches. Each end of along branches has knobbed. The thin and sharp branch was added at the end of the main long branch. The PCR product showed 946 bp. The sequencing result of O.circumcincta ITS2 compare with the data in Genebank showed 100% homology. (Althought in morphological evaluatio) the spicules length of goat isolates in this study was longer than the result of another goat isolates reported in the world, but ITS2 locus showed 100% homology. The mean length of spicules was 311 – 321.7 micron in O.occidentalis. The spicules was dark brown, thck and divided to three branches. The arrow shape gubernaculums was visiable. O.occidentalis ITS2 sequence showed 99% similarity with Marshallagia marshalli and 92% similarity with the previous species. The mean length of spicules was 222.5 – 227.5 micron in O.trifurcata. The spicules are pigmented brown, thick and divided to three branches. Each end of a long branche has knobbed. The sequence of O. trifurcata showed 98% similarity with O.circumcincta. Any nucleotide sequence was found in Genbank of O.occidentalis and O.trifurcata. The present study showed thought three species O.circumcincta, O.occidentalis and O.trifoscata could be differentiate by morphological property but ITS2 nucleotide sequence contain insignificant diversity between these three species. Beside, to complete the molecular data of these species, it should be characterized the cox1 nucleotid. Sequence considering other host and ecological situation.
