عنوان پایان‌نامه
ارزیابی اثرات عصاره الکلی پروپولیس و اسانس زنیان بر بیان ژن حدت Mop۳ از جدایه های میکروسپوروم کنیس
- رشته تحصیلی
- قارچ شناسی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 16 ارشد;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 16 ارشد;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 57715
- تاریخ دفاع
- ۲۶ شهریور ۱۳۹۱
- دانشجو
- نکیسا سهرابی حقدوست
- استاد راهنما
- علیرضا خسروی
- چکیده
- میکروسپوروم کنیس از اصلی ترین عوامل ایجاد درماتوفیتوزیس در گربه ها و سگ ها بوده و معمولترین عامل عفونت در انسان نیز محسوب می شود. ترشح پروتئاز ها توسط در ماتوفیت هااز جمله میکروسپوروم کنیس، به عنوان یک فاکتور حدت مهم می باشد. اندوپروتئاز ها و اگزو پروتئازهای مختلفی از درماتوفیت ها ترشح می شوند. این اندوپروتئازها به دو خانواده پروتئینی بزرگ به نام سرین پروتئاز (سوبتیلیزین ) و فونگالیزین (متالوپروتئاز )تعلق دارند ، که نقش مهمی در هضم پروتئین دارند. این پروتئاز ها اتصال درماتوفیتها را تسهیل می کنند. پروتئین Mep3 یک متلوپروتئاز از دسته فونگالیزینها است که در طی عفونت درماتوفیتی با میکروسپوروم کنیس بیان می شود و تصور می گردد تنظیم بیان این ژن درتهاجم به بافت هدف توسط این درماتوفیت با اهمیت است. اثرات ضد قارچی اسانس زنیان وعصاره الکلی بره موم که ماده موثر آن به ترتیب تیمول و فلاونوئید می باشد ، به اثبات رسیده است. در تحقیق حاضر اثرات ضد قارچی اسانس زنیان و عصاره الکلی بره موم بر روی 25 جدایه میکروسپوروم کنیس بررسی گردید و همچنین اثر ترکیبات مذکور بر بیان ژن Mep3 مورد ارزیابی قرار گرفت. جهت تعیین MIC و MFC جدایه ها از روش ماکرودایلوشن براث استفاده گردید. همچنین اثر اسانس روی تغییر شکل ماکروکونیدی های این قارچ به روش میکروسکوپی نیز به اثبات رسید. جهت بررسی اثرات اسانس زنیان و عصاره الکلی بره موم بر بیان ژن Mep3 جدایه های مورد آزمایش قبل و بعد از تاثیر اسانس و عصاره ، از محیط کشت اختصاصی به نامsoye peptone ، که القاکننده فعالیت پروتئولیتیک می باشد، استفاده گردید و بعد از 10 روز RNA نمونه های کشت داده شده با استفاده از کیت استخراج RNA شرکت فرمنتاز، از توده قارچی استخراج گردید و آزمون RT-PCR با ژن Mep3 انجام گردید. نتایج آزمون MIC نشان داد ، اسانس زنیان و عصاره الکلی بره موم اثر مهاری بر روی رشد تمامی گونه های قارچی مورد آژمایش دارد. نتایج RT- PCR نشان داد که ژن Mep3 در نمونه های قارچی که تحت تاثیر اسانس و عصاره قرار نگرفته بودند ، بیان می گردد ولی ژن Mep3 در نمونه های بعد از تاثیر بیان نمی گردد و باتدی مشاهده نشد .
- Abstract
- Microsporum canis is the main ethiologic agent of dermatophytosis in dog and cat, also is the most commen dermatophytes infection in human. The secretion of proteases by dermatophytes such as microsporum canis are important virulence factor. Dermatophyte secrete endo and exoproteases. Endoproteases are member of two protein families, the subtilisin ( serine proteases) and fungalysin ( metalloproteases). These proteases are responsible for adhesion to steratum corneom. Mep3 is known as metalloproteases of fungalysin family that secretes during dermatophyte infection due to microsporum canis. The regulation of expression of this gene ( Mep3) is important for invasion to target tissue.Antifungal effect of trachyspermum ammi essence and ethanolic extract of propolis have been shown, because of thymol and flavenoeid respectively. In this study, antifungal effect of Trachyspermum. Ammi essence and ethanolic extract of propolis carried out on 25 microsporum canis isolates. Also the level of Mep3 expression during of the Trachyspermum. Ammi essence and ethanolic extract of propolis treatment were evaluated. For determination of MIC and MFC macrodilution broth method were used. On the other hand the effect of these component on changes macroconidia morphology were established by microscopic examination.Mep3 expression was assessed befor and after theses component treatment by using soye peptone medium as a promoter proteolitic activity and incubated at 30? for 10 days. Then, RNA extracted by RNA extraction kit and RT-PCR was performed with gene Mep3. the result showed the inhibitory effect of Trachyspermum. Ammi essence and ethanolic extract of propolis on fungal growth. The MIC range of Trachyspermum. ammi essence and ethanolic ex tract of propolis were 0.2- 30 ?g/ml and 0.2- 488 ?g/ml, respectively Statistical analysis showed a significant difference between MIC Trachyspermum. ammi and MIC propolis( P?0.05) RT-PCR results showed that MEP3 gene expression in samples that was not affected by plant essential oil and propolis, were expressed, but in sample which exposed to the plant essential oil were not expressed.
