عنوان پایان‌نامه
تفریق مولکولی دوجدایه دیکروسلیوم
- رشته تحصیلی
- انگل شناسی دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 15 ارشد;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 15 ارشد;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 53745
- تاریخ دفاع
- ۰۶ تیر ۱۳۹۱
- دانشجو
- سارا خلیلی نوگورانی
- استاد راهنما
- بهنام مشگی
- چکیده
- دیکروسلیوم دندریتیکم از جمله انگل های کرمی شایع در نشخوارکنندگان و دیگر علفخواران دنیا و ایران است. بیماری انگلی ناشی از این ترماتود کبدی از فراوانی زیادی بخصوص در نشخوارکنندگان کوچک و بزرگ برخوردار بوده که به دلیل عدم وجود داروی کاملا موثر برای درمان آن یکی از عاملین مهم خسارات اقتصادی در پرورش نشخوارکنندگان محسوب می شود. با توجه به اهمیت بهداشتی و اقتصادی این بیماری کرمی و از سویی احتمال وجود پلی مورفیسم میزبانی و جغرافیایی، در بررسی حاضر پارامتر های مورفومتریک و ارزیابی مولکولی براساس بخشی از ژن COI کرم بالغ دیکروسلیوم دندریتیکم در دو جدایه گاو و گوسفند انجام گردید. بدین منظور کرم بالغ دیکروسلیوم دندریتیکم از کبد دو میزبان شامل گاو و گوسفند از کشتارگاه های شهر های تهران، اهواز، بندر انزلی، قم و ری جمع آوری شد و تحت آزمایش قرار گرفت. در بررسی ریخت شناسی شاخص های قابل اندازه گیری و با اهمیت شامل طول و عرض کرم بالغ، طول و عرض هر دو بیضه و تخمدان به همراه اندازه غدد ویتلین تعیین شد. در ارتباط با تشخیص مولکولی با توجه به اهمیت ژنوم میتوکندریایی در تعیین هویت سویه ها و تحلیل ارتباطات فیلوژنیک-تاکسونومیک از ژن COI استفاده گردید. جهت بررسی مولکولی، مراحل مختلفی شامل استخراجDNA ، PCR، الکتروفورز، تخلیص محصول PCR و نهایتا تعیین توالی انجام پذیرفت. در بررسی نتایج ریخت شناسی اگر چه اختلاف اندکی بین شاخص های تحت اندازه گیری با کلید های ثبت شده در دنیا دیده می شود ولی وجود گونه دیکروسلیوم دندریتیکم در هر دو جدایه گاو و گوسفند مشخص می باشد. در ارتباط با بررسی مولکولی، تعیین توالی 6 جدایه گاو (5 نمونه از تهران و 1 نمونه از انزلی) و 4 جدایه گوسفند (از تهران، اهواز، ری و قم ) نشان داد که از 6 جدایه گاو سه جدایه شباهت بسیار نزدیک (95%) با بانک جهانی ژن (690758JF) دارند، بیشترین اختلاف با بانک ژن مربوط به جدایه انزلی (20%) بود. از دو جدایه دیگر (که آنها هم از تهران بودند) تفاوت توالی تعیین شده با بانک جهانی ژن 18% و 7% مشخص گردید (690758JF). در مورد جدایه گوسفند دو جدایه از قم و ری با بانک ژن هیچ شباهتی ندارند اگر چه در بین این دو جدایه تشابه 90% وجود دارد، بدیهی است که با دو جدایه دیگر (تهران و اهواز) هم تشابهی نداشته باشند. توالی دو جدایه دیگر گوسفند از تهران و اهواز با بانک ژن اختلاف 10% را نشان می دهند. با توجه به نتایج بدست آمده و مقایسه آن با اطلاعات موجود در بانک جهانی ژن می توان به وجود تنوع ژنتیکی براساس توالی نوکلئوتیدی COI معتقد بود اگر چه باید در تحقیقات آتی ترادف کامل ژن مذکور و بررسی آن در میزبان های دیگر نظیر گاومیش، بز و شتر، همچنین استفاد ازNDI را در این ارتباط مد نظر قرار داد.
- Abstract
- Dicrocoelium dendriticum is one of the common helminthic parasites in ruminants and other herbivores of the world including Iran. The parasitic disease caused by this liver trematode has got a high frequency particularly in small and large ruminants and since there is not a completely effective drug for its treatment, it is one of the important causes of economic disadvantages in husbandry of ruminants. Noting the importance of dicrocoeliasis in hygiene and economy and on the other hand the probability of host and geographical polymorphism, in the study the morphometric structures and molecular characterization based on the COI gen of Dicrocoelium dendriticum in cattle and sheep isolates were done. In order to the adult worms of Dicrocoelium dendriticum were collected from the liver of two hosts from at slaughter houses of different geographical including, Tehran, Ahvaz, Anzali, Qom and Rey. In morphological examination, measurable and important specialties including length and width of adult worm, length and width of each of testis and ovaries in addition to the measure of vitelline glands were assessed. In relation with molecular diagnosis, considering the importance of mitochondrial genome in characterization of isolates and analysis of phylogenic-taxonomic relationships, the gene COI were used. In order to molecular examination, different steps including DNA extraction, PCR, electrophoresis, PCR product purification and finally sequencing were performed. Although few differences have been found between the measured parameters and the ones registered in the world, the presence of the species " Dicrocoelium dendriticum" in both isolates of cattle and sheep is obvious. In molecular study, sequencing the 6 isolates of cattle (5 samples from Tehran and 1 sample from Anzali) and the 4 isolates of sheep (from Tehran, Ahvaz, Rey and Qom) demonstrated that 3 of the 6 isolates of cattle had high homology (95%) with the ones in the gene bank (registered with number 69075801Jf) and the most differences with the gene bank were observed for the isolates from Anzali (20%). The other 2 isolates (which were from Tehran) showed 18% and 7% differences in their genome sequences with the gene bank. The sheep isolates from Qom and Rey not showed any similarity with the gene bank, however these two isolates have a 90% similarity with each other, and its is clear that they do not have any similarity with the isolates from Tehran and Ahvaz which showed just a 10% difference with the gene bank. Noting the results obtained and comparing them with the information existing in the gene bank, we can believe in the genetic variation based on nucleotide sequencing of COI, however complete sequencing of the gene mentioned and studying on it in some other hosts such as buffalo, goat and camel, and also using NDI should be considered in this field.
