عنوان پایان‌نامه
ارزیابی اثر ضد قارچی اسانس زنیان
- رشته تحصیلی
- قارچ شناسی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 14 ارشد;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 14 ارشد;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 53539
- تاریخ دفاع
- ۰۸ خرداد ۱۳۹۱
- دانشجو
- ایرج اشرافی تمای
- استاد راهنما
- علیرضا خسروی
- چکیده
- کاندیدیازیس دهانی شایع ترین عفونت قارچی در بین مبتلایان به ویروس HIV می باشد. از مهمترین عامل ایجادکننده این بیماری، کاندیدا آلبیکنس را می توان نام برد که علائم بالینی فراوانی را در این بیماران برجای می گذارد. تشخیص به موقع گونه های کاندیدا، در بقای بیماران با ضعف سیستم ایمنی بسیار کمک کننده است به لحاظ اینکه می توان درمان ضدقارچی موثر را در شرایطی که هنوز میزان قارچ پایین است آغاز نمود. گرچه مصرف آنتی بیوتیک ها موجب بهبودی و برطرف شدن عوامل عفونی و عفونت می گردد ولی همین امر باعث پدیدار شدن میکروارگانیسم های مقاوم شده و از طرف دیگر ضعف و ناتوانی بیمار را به همراه دارد. در سال های اخیر رشد قابل ملاحظه ای در تولید محصولات طبیعی، با توجه به توانایی این مواد و اثرات جانبی یا سمیت کمتر در مقایسه با آنتی بیوتیک ها ایجاد شده است. توجه محققین و قارچ شناسان به اپیدمیولوژی بیماری های قارچی باعث گسترش ارزیابی و تعیین ارتباط ژنتیکی، بین جدایه های یک گونه مشابه گردیده است. ارتباط بین میکروارگانیسم های همزیست، تشخیص منبع یا مخزن عفونت، کنترل سویه های مقاوم و طبقه بندی سویه های نزدیک به هم از اهمیت های ژنوتایپینگ به حساب می آید. در این مطالعه 70 بیمار HIV مثبت از بیمارستان امام خمینی مورد بررسی قرار گرفتند. 14/77 درصد بیماران را مردان و 86/22 درصد را زنان تشکیل می دادند. نمونه های دهانی در محیط های کشت قارچی کشت داده شد و از روش های مختلفی جهت شناسایی کاندیدا آلبیکنس استفاده گردید. توانایی شناسایی کاندیدا آلبیکنس با محیط کروم آگار 5/92 درصد، تولید لوله زایا 5/94 درصد، محیط کورن میل آگار 5/92 درصد، کشت در 45 درجه سانتی گراد 87 درصد و کیت تجاری RapID5/92 درصد گزارش گردید. در ادامه کار برای تایید نهایی از روش مولکولی PCR و با استفاده از دو پرایمر اختصاصی CALB1 و CALB2(L47111 , L28817) استفاده شد و در نهایت 50 جدایه کاندیدا آلبیکنس شناسایی گردید. حساسیت جدایه های کاندیدا آلبیکنس با روش انتشار دیسک، نسبت به داروهای ضد قارچی فلوکونازول 58 درصد، کتوکونازول 62درصد، نیستاتین 100درصد، آمفوتریسین B96درصد، کلوتریمازول 70 درصد و مقاومت 100 درصدی در برابر فلوسیتوزین مشاهده گردید. همچنین حساسیت جدایه های کاندیدا آلبیکنس نسبت به اسانس زنیان با دو روش انتشار دیسک و میکرودایلوشن براث اندازه گیری شد و میزان MICدر 72 درصد نمونه ها 500PPM و در 28 درصد دیگر 750PPM و میزان MFCدر 70 درصد نمونه ها 750PPM و 30 درصد نمونه ها 1000PPM گزارش گردید. در بررسی ژنوتیپ نمونه ها از ژن 25SrDNAاستفاده شد و جدایه ها در 3 ژنوتیپ A، Bو C قرار گرفتند که ژنوتیپ A با 66 درصد، فراوانترین ژنوتیپ را به خود اختصاص داده بود. در تایپینگ به منظور تحت تیپ این ژنوتیپ ها، از توالی های تکراری(RPS) استفاده شد که در نهایت 10 تحت تیپ در این سه ژنوتیپ مشاهده شد که ژنوتیپ A3 فراوانترین تحت تیپ در بین این جدایه ها را به خود اختصاص داده بود. در تایپینگ بوسیله RAPD-PCR از دو پرایمر CA1 و CA2 استفاده گردید که در این آزمون، تنوع ژنتیکی با شناسایی 10 پروفایل مشخص گردید. با یکسان بودن پروفایل های ایجاد شده در روش RAPD-PCR با 25SrDNAو RPS، به نظر می رسید که توالی های تکراری در کاندیدا آلبیکنس(RPS) می تواند جایگزین خوبی برای روش RAPD-PCR باشد که این موضوع مطالعه فراتری را می طلبد.
- Abstract
- Oral candidiasis is the most common fungal infection among HIV-positive patients. Candida albicans is the most important cause of disease, which could lead to several clinical symptoms in these patients. Early detection of Candida species, lead to start effective antifungal therapy when the rate of the fungus is low and therefore can be very helpful in survive of patients with weak immune systems. The use of antibiotics leads to improve and eliminate infectious agents and infection but also could lead to the emergence of resistant micro organisms and patient’s weakness. In recent years a significant growth in natural products has been created, according to the antimicrobial ability of these materials and fewer side effects or toxicity against antibiotics. Attention of researchers and Mycologists to the epidemiology of fungal diseases lead to spread of evaluation and determination of the genetic relationship between isolates of a similar species. Relationship between flora microorganisms, identifying the source or reservoir of infection, control of resistant strains and classification of similar strains are the importance of genotyping. In this study, 70 HIV positive patients from Imam Khomeini Hospital are surveyed. %77.14 of patients were male and %22.86 were female. Oral samples were cultured in fungal culture media and different methods were used to identify Candida albicans. Ability to identify Candida albicans were reported %92.5 by chrome agar medium, %94.5 by production of germ tube, %92.5 by corn meal agar medium, %87 by culture at 45 ° C and %92.5 by RapID commercial kit. For final confirmation, the work were conducted to PCR using two specific primers CALB1 and CALB2 (L47111, L28817) and eventually 50 isolates of Candida albicans were identified. Susceptibility of Candida albicans isolates by disk diffusion method, against antifungal drugs including fluconazole, ketoconasole, Nistatin, Amphotricin B, Clotrimazole and flucytozine were observed 58%, 62%, 100%, 96%, 70% and 0%, respectively. The sensitivity of Candida albicans isolates to Zenian extract(Trachyspermum copticum) was measured by two methods, disk diffusion method and broth micro dilution method. MIC value were reported 500 PPM in 72% and 750 PPM in 28% of samples and MFC value were reported 750 PPM in 70% and 1000 PPM in 30% of samples. The 25SrDNA gene was used for genotype survey and isolates classified in 3 genotypes A, B and C. Genotype A, with 66 percent, was abundant genotype. Repetitive Sequence (RPS) was used to sub typing of these genotypes and eventually 10 subtype were observed in these 3 genotypes, in which A3 genotype, among the isolates, was the abundant subtype. In typing by RAPD-PCR by two primers, CA1 and CA2, the genetic diversity was determined by identification of 10 profiles. Profiles in RAPD-PCR method are similar with 25SrDNA and RPS method and therefore we could conclude that repetitive sequences can be replaced by RAPD-PCR in Candida albicans however this issue requires further study.
