عنوان پایان‌نامه
بررسی ردیابی ویروس هپاتیت B با روش الکتروشیمی مبتنی بر نانو ذرات مغناطیسی
- رشته تحصیلی
- بیوفیزیک
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 11053ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 53688
- تاریخ دفاع
- ۲۱ تیر ۱۳۹۱
- دانشجو
- سارا نورانی
- استاد راهنما
- هدایت اله قورچیان
- چکیده
- ایمونوحسگرها به دلیل برهم کنش اختصاصی و تمایل بسیار بالای آنتی ژن-آنتی بادی، در تشخیص غلظت های اندک آنتی ژن کاربرد دارند. در طرح حاضر برای تشخیص و ردیابی هپاتیت B از یک ایمونوحسگر الکتروشیمیایی استفاده شد. برای ایجاد جهت یابی مناسب آنتی بادی تثبیت شده از سیستم بیوتین-استرپتواویدین استفاده گردید. به این ترتیب که از آنتی بادی های بیوتینیله که به صورت تجاری در دسترس هستند، به عنوان آنتی بادی اولیه استفاده شد. این آنتی بادی ها روی نانوذرات مغناطیسی با پوشش استرپتواویدین تثبیت شد. پس از وارد کردن آنتی ژن سطحی هپاتیت B (HBsAg) و اتصال آن به آنتی بادی اولیه، آنتی بادی ثانوبه که توسط آنزیم horseradish peroxidase (HRP) نشان دار شده بود به این مجموعه اضافه گردید. سپس به این مجموعه (نانوذره مغناطیس-آنتی بادی اولیه-آنتی ژن-آنتی بادی ثانویه نشان دار شده با HRP)، سوبستراهای آنزیم HRP شامل هیدروژن پراکسید و o-آمینوفنل اضافه گردید تا در اثر برهم کنش آنزیم HRP با دو سوبسترای خود، محصول الکترواکتیو 3- آمینوفنوکسازون (3-APZ) تولید گردد. در مرحله آخر به کمک یک آهن ربای خارجی، مجموعه مذکور در ته ویال جمع آوری شد و محصول الکترواکتیو به سل الکتروشیمیایی منتقل گردید تا به کمک روش ولتامتری چرخه ای میزان محصول که متناسب با غلظت HBsAg است تعیین شود. پس از بهینه کردن شرایط آزمون، منحنی استاندارد برای غلظت های مختلف آنتی ژن رسم شد و حداقل غلظت قابل تشخیص برای HBsAg در این روش pg.ml-1 9/0 به دست آمد. و پاسخ در محدوده غلظت ng.ml-1 015/0-001/0 خطی بود.
- Abstract
- Immunosensors are useful tools for the detection of antigen at very low concentration based on the specific interaction of antigen-antibody. In the present work, we developed an electrochemical immunosesnor for detection of hepatitis B surface antigen (HBsAg). Biotin-streptavidin system was used for appropriate orientation of immobilized antibody. The biotinylated antibody was immobilized on the surface of magnetic nanoparticles which were coated by streptavidin. Then HBsAg added to the mixture and it bonded to primary antibody. Afterward horseradish peroxidase (HRP) labeled secondary antibody added to this complex. Two substrates of HRP include hydrogen peroxide and o-aminophenol used for producing of an electroactive product, 3-aminophenoxazone (3-APZ). At last, the complex collected by an external magnet and the solution of 3-APZ was transfered to an electrochemical cell for detection of 3- APZ which is proportional to HBsAg concentration. The immuno-sensor responded towards antigen in the linear range of 0.001 – 0.15 ng.ml-1 and detection limit was 7 pg.ml-1. The other parameters for this immuno-sensor were optimized
