عنوان پایان‌نامه
« ارزیابی ارتباط برخی جدایههای Fusarium solani بر اساس تعیین گروههای سازگار رویشی، نشانگر مولکولی rep-PCR و آزمون بیماریزایی»
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی - بیماری شناسی گیاهی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 5080;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 54947
- تاریخ دفاع
- ۲۸ شهریور ۱۳۹۱
- دانشجو
- مریم فلاحی
- استاد راهنما
- محمد جوان نیکخواه
- چکیده
- گونه Fusarium solani از مخربترین بیمارگرهای پژمردگی و پوسیدگی خشک سیب زمینی در انبار و مزرعه محسوب می شود. به دلیل اهمیت این بیماری و شدت زیاد خسارت وارده، در این تحقیق تنوع ژنتیکی 54 جدایه گونه F. solani از سیب زمینی و تعدادی از میزبان های دیگر (نخود، لوبیا، هندوانه، خربزه و خیار) بر اساس شناسایی گروه های سازگار رویشی مورد بررسی قرار گرفت. جهش یافتگان nit برای 52 جدایه با استفاده از محیط های غذایی حاوی پنج تا هفت درصد کلرات پتاسیم بدست آمد. پس از تلاقی جهش یافتگان nit روی محیط کشت MM، 23 گروه سازگار رویشی (VCG) مشخص شد. این گروه ها با اسامی VCG Aتا VCG W نام گذاری شدند. گروه VCG A با 18 عضو به عنوان بزرگترین گروه مشخص شد. تعداد 17 گروه دیگر به عنوان گروه های تک عضوی شناسایی شدند. وجود تعداد زیاد گروه های تک عضوی نشان دهنده تنوع ژنتیکی نسبتاً زیاد در بین جدایه های مورد مطالعه است. بین منطقه جغرافیایی جدایه ها و همچنین میزبان با گروه های سازگار رویشی مشخص شده، ارتباطی مشاهده نشد. همچنین از میان 23 جدایه منتخب گروه های سازگار رویشی مورد استفاده در آزمون بیماریزایی روی بوته سیب زمینی رقم آگریا تنها چهار جدایه علایمی نشان ندادند و در گروه صفر قرار گرفتند. بقیه نمایندگان گروه های VCG حداقل توانایی ایجاد پوسیدگی خفیف ریشه و کاهش رشد و غیر معمول شدن ظاهر گیاه را داشتند. همچنین در نتیجه آزمون بیماریزایی 23 جدایه منتخب از گروه های سازگار رویشی روی غده سیب زمینی رقم آگریا، 7/8 درصد جدایه ها بیماریزا نبودند. بقیه جدایه های نماینده گروه های VCG توانایی ایجاد بیماری پوسیدگی خشک را داشتند. آزمون بیماریزایی نه جدایه از گونه F. solani بدست آمده از ساقه، طوقه، ریشه و غده گیاه سیب زمینی روی تعدادی گیاهان شامل انواع گیاهان زراعی تیره Solanaceaeاز قبیل گوجه فرنگی، بادمجان، فلفل و گروهی دیگر از گیاهان از قبیل سویا، لوبیا، آفتابگردان، نخود، خیار و سیب زمینی رقم آگریا انجام شد. علاوه بر گیاه سیب زمینی، بروز بیماری روی گیاه نخود، فلفل و بادمجان بحث اختصاصی بودن میزبان در قارچ F. solani را تحت تاثیر قرار داد، به این معنی که بر خلاف تصوری که می رفت، جدایه های سیب زمینی انتخاب شده برای این آزمون صرفاً بر روی سیب زمینی بیماریزا نبودند و توانایی ایجاد بیماری روی سایر گیاهان را داشتند. انگشت نگاری DNA جدایه های گونهF. solani بدست آمده از چهار نوع میزبان (سیب زمینی، نخود، لوبیا، هندوانه، طالبی و خیار) بر اساس نشانگر rep-PCR و URP-PCR ضمن نشان دادن تنوع ژنتیکی زیاد در جدایه ها، توانست با استفاده از نشانگر rep-PCR و در سطح تشابه 30درصد 54 جدایه را به به دو گروه با اسا می BOX-A و BOX-B تفکیک نماید. همچنین با استفاده از نشانگر URP-PCR و در سطح تشابه 40 درصد جدایه های مذکور به شش گروه اصلی تفکیک شد، که این گروه ها با اسامی URP-A تا URP-F نامگذاری شدند. همچنین تلفیق داده های حاصل از این دو نشانگر نیز در سطح چهل درصد چهار گروه اصلی در بین 54 جدایه ی F. solani مشخص کرد که با حروف A تا D نامگذاری شدند. اعضای این چهار گروه 100% -40% با هم قرابت داشتند. در بین چهار گروه شناسایی شده، یک گروه تک عضوی مشخص شد و سه گروه دیگر هر کدام شامل زیرگروه هایی بودند. تعداد کل زیرگروه های تعیین شده برای این سه گروه اصلی 12 زیر گروه بود که گروه A با شش زیر گروه و 34 عضو به عنوان بزرگترین گروه معرفی شد. با توجه به نتایج، همبستگی مشخصی بین منشاء جغرافیایی، میزبان و گروه های سازگار رویشی با گروه های مشخص شده بر اساس پنج آغازگر مشاهده نشد.
- Abstract
- Fusarium solani is the most important pathogen of potato tubers that is made tuber rot in storage and root rot of potato plants in fields. Due to the importance of disease and damage caused in the most part of potato growing regions, genetic diversity of 54 isolates of F. solani from potato and other hosts (Beans, Pea, Melon, Watermelon and Cucumber) were evaluated by analysis of vegetative compatibility groups (VCG). Nitrate-nonutilizing mutants have been obtained on medium containing %7 KClO3. The nit mutants of 52 isolates were paired on minimal medium(MM) and 23 VCGs were identified.These groups were named with the codes VCGA to VCGW. Among these groups, 17 VCG were identified as single member. there was no correlation between VCGs and origin of isolates and their hosts. Pathogenicity of 23 isolates of F. solani as VCGs indicators was examined on potato plant and tubers of Agria cultivar. The results of this section indicate that except of 4 isolates other isolates were pathogenic on potato plant, and had various virulence. Of 23 VCG indicutors tested on Potato tubers only 2 isolates caused no symptoms on tubers of Agria cultivar and 22 isolates had various virulence. At the next study section, pathogenicity of 9 isolates of F. solani from potato was examined on potato, tomato, eggplant, pepper and other plant such as soybean, sunflowers, peas, beans, cucumbers. The results showed that the pathogencity in isolates of F. solani is not related to host specificity and potato isolates in addition to potato were pathogenic on pepper, eggplant and peas. In order to study genetic diversity using rep-PCR and URP-PCR, PCR was carried out using five primers BOX and 38F, 6R, 2R and 2F Amplicons were analyzed using NTSYSpc-2.02e and the phenogram was drawn. 54 isolates were grouped in four groups and 12 subgroup. A group with 34 isolates formed the most biggest group No correlation was detected between geographic origins of isolates, their host and VCGs.
