عنوان پایان‌نامه
بررسی مهار تشکیل تجمعات آمیلوئیدی پروتئین لیزوزیم سفیده تخم مرغ با استفاده از ملکولهای دی اتیل استیل بسترول وفلوریدزین
- رشته تحصیلی
- بیوفیزیک
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 11555ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 78081;کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 11555ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 78081
- تاریخ دفاع
- ۲۸ شهریور ۱۳۹۵
- دانشجو
- هادی ندایی
- استاد راهنما
- علی اکبر صبوری
- چکیده
- استراتژی‌های مختلفی برای مهار تشکیل تجمعات آمیلوئیدی، به‌عنوان عامل اصلی بروز علائم بالینی بیماری‌های کنفورماسیونی همچون آلزایمر، پارکینسون، دیابت نوع 2 و ... گزارش شده است که ازجمله آن‌ها می‌توان به استفاده از ریز مولکول‌های پلی‌فنولی اشاره کرد. در این پروژه، شبیه‌سازی تشکیل این تجمعات با استفاده از پروتئین لیزوزیم سفیده تخم‌مرغ در حالت برون تنی و بررسی تأثیر مهاری ریز مولکول‌های پلی‌فنولی فلوریدزین و دی‌اتیل‌استیل‌بسترول بر آن توسط تکنیک‌هایی همچون سنجش فلورسانس اتصال ThT، سنجش دورنگ نمایی دورانی (CD)، آنیزوتروپی نیل قرمز (NR) و عکس‌برداری با میکروسکوپ الکترونی موردمطالعه قرار گرفت. ابتدا شرایط صحیح فیبریلاسیون لیزوزیم تعریف و فیبریل‌های آمیلوئیدی تشکیل‌شده تعیین ویژگی شدند. در مرحله بعد ریز مولکول‌های پلی‌فنولی با غلظت‌های مختلف در مسیر فیبریلاسیون کار گذاشته شد. برای آماده‌سازی نمونه‌ها از پروتکل کاملاً مشخصی استفاده شد، به‌طوری‌که غلظت پروتئین، درصد DMSO و حجم در تمامی نمونه‌ها یکسان و تنها متغیر موجود افزایش غلظت پلی‌فنول‌ها بود. همچنین، فرایند فیبریلاسیون از ابتدا تا انتها به‌طور کامل کنترل شد و هیچ‌گونه کاهش حجم، ناهمگنی در محلول‌ها و تغییر دمای انکوباسیون رخ نداد. در انتها، نمونه‌ها با استفاده از تکنینک‌های فوق تعیین ویژگی شدند و نتایج حاصل نشان دادند که میزان افزایش فلورسانس ThT، درصد ساختارهای بتای تشکیل‌شده و نیز میزان و اندازه فیبریل‌های آمیلوئیدی تولیدشده در تمامی محلول‌ها یکی بود. این امر نشان داد که پلی‌فنول‌های فلوریدزین و دی‌اتیل‌استیل‌بسترول مهارکننده فرایند فیبریلاسیون نیستند و وجود آن‌ها در کنار پروتئین، مانع از تشکیل تجمعات آمیلوئیدی نمی‌شود.
- Abstract
- Many strategies of inhibiting amyloid aggregates (beta sheet-rich fibrillary structures), as main causes of conformational disease including Alzheimer’, Parkinson’s, type 2 diabetes, etc. have been introduced. One of these strategies is the employing of polyphenolic small molecules. In this project, the in vitro simulation of hen egg white lysozyme (HEWL) aggregation and the inhibitory effect of two polyphenols, phloridzin (Phz) and diethylstilbestrol (Des) were studied through some assays including ThT binding fluorescence, circular dichroism (CD) spectroscopy, Nile red (NR) anisotropy, and transmission electron microscopy (TEM). Initially, the best conditions of aggregation induction was defined following by the characterization of formed amyloid fibrils. Then, putting Phz and des into the fibrillation pathway was done. To prepare samples, an obvious protocol was used so that the same HEWL concentration, the same percentage of DMSO, and the same samples volume were kept constant from beginning to the end of the aggregation process. The small molecule concentration was the only variable. On the other hand, through the strict control of the process, no volume decreasing, no heterogeneity and no any temperature change of the solution were occurred. Finally, the sample characterization was performed by above-mentioned assays. Obtained results showed that the amount of ThT fluorescence enhancement, the formed beta structures, and size of amyloid fibrils were identical in all samples. It can be concluded that Phz and Des polyphenols are not inhibitors for aggregation of HEWL so that their presences are useless for the protein to be stable. Keywords: Amyloid aggregates, HEWL, phloridzin, diethylstilbestrol, protocol, inhibition
