عنوان پایان‌نامه

تاثیر چند اگونیست مسیر پیام رسانی Gaq بر بیان ژن های هدف پروتین Catenin-بتا در سلول های SW۴۸۰



    دانشجو در تاریخ ۱۱ مهر ۱۳۹۵ ، به راهنمایی ، پایان نامه با عنوان "تاثیر چند اگونیست مسیر پیام رسانی Gaq بر بیان ژن های هدف پروتین Catenin-بتا در سلول های SW۴۸۰" را دفاع نموده است.


    رشته تحصیلی
    زیست‌شناسی‌-علوم‌سلولی‌مولکولی‌
    مقطع تحصیلی
    کارشناسی ارشد
    محل دفاع
    کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6438;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 78552;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6438;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 78552
    تاریخ دفاع
    ۱۱ مهر ۱۳۹۵
    دانشجو
    لیلی نراقی
    استاد راهنما
    نسرین معتمد, سیدمحمود عرب نجفی
    چکیده
    لینک فایل چکیده
    مسیر پیام رسانی متعارفsignaling Wnt توسط خانواده‌ی بزرگ لیگاندهای Wnt فعال می گردد. پروتئین‌های Wntدر غشای سلول به گیرنده های خود متصل شده و فعالیت پیام رسانی سلولی را آغاز می کنند که این فعالیت پیام رسانی در کنترل فعالیت های مختلف سلولی مانند تکثیر سلولی، قطبیت سلولی و تعیین سرنوشت سلولی نقش دارد. نقش مرکزی در مسیر متعارفsignaling Wnt را پروتئینی به نام ?-Catenin ایفا می کند که پایداری آن در سلول توسط یک کمپلکس پروتئینی به نام کمپلکس تخریب کننده (destruction complex) تعیین می شود. هنگامی که لیگاندWnt به گیرنده ی Frizzled و کمک گیرنده ی LRP6 متصل می شود، پروتئولیز ?-Catenin در کمپلکس تخریب کننده مهار می گردد. ?-Catenin تجمع یافته به هسته‌ی سلول انتقال پیدا کرد‌ه و پس از اتصال به فاکتورهای رونویسی TCF/LEF بیان ژن های هدف مسیر Wnt signaling را تحریک می کند.‌‌‌‌ عدم تنظیم مسیر متعارفsignaling Wnt از طریق افزایش فعالیت پروتئین ?-Catenin اهمیت خاصی در ایجاد سرطان کولون دارد. شباهت ظاهری گیرنده های Frizzled به گیرنده های جفت شونده با G پروتئین های سه زیر واحدی (heterotrimeric G-proteins) به همراه داده های ژنتیکی و بیوشیمیایی که بیانگر ارتباط G پروتئین ها با مسیر Wnt signaling هستند، مدت زیادی است که فرضیه ی میانکنش گیرنده های Frizzled با G پروتئین ها را مورد حمایت قرار داده است. آزمایشات پیشین ما نشان داده است که فعال شدن G?q در اووسیت های وزغ زنوپوس (Xenopus laevis) منجر به مهار آنزیم GSK3? و پایداری پروتئین ?-Catenin و تجمع سلولی این پروتئین می گردد. مطالعات دیگر ما با استفاده از سلول های HEK293T پستانداران نیز نتایج یکسانی را در پی داشته است. در این پایان نامه برای بررسی بیشتر ارتباط فعالیت دو پروتئین G?q و ?-Catenin از رده ی سلولی سرطان کولون SW480 استفاده شد. به منظور مطالعه ی اثر G?q درون سلولی بر فعالیت رونویسی پروتئین ?-Catenin، این سلول ها با سه آگونیست G?q شامل کرباکول، ترومبین و تریپسین تیمار شدند. سپس آزمایشات Real time-PCR و Reverse transcription-PCR برای اندازه گیری بیان سه ژن هدف پروتئین ?-Catenin (CCND1، C-MYC و FGF20) انجام شد. نتایج این آزمایشات نشان داد که تیمار سلول های SW480 با کرباکول، ترومبین و یا تریپسین تاثیر محسوسی روی بیان این سه ژن ندارد.
    Abstract
    The canonical Wnt signaling pathway is activated by some members of the Wnt family of glycoproteins. When the Wnt ligands bind to their cognate receptors at the plasma membrane, they initiate intracellular signaling cascades which control a wide variety of biological processes including cell proliferation, cell polarity and cell fate specification. The central player in the canonical Wnt cascade is ?-Catenin, a multifunctional protein whose stability is regulated by the destruction complex. Upon interaction of the Wnt ligand with the Frizzled receptor and the LRP6 co-receptor, ?-Catenin degradation is blocked in the destruction complex. Accumulated ?-Catenin is translocated into the nucleus and binds the TCF/LEF transcription factors to regulate expression of the Wnt target genes. The canonical Wnt signaling through ?-Catenin is of particular importance for the development of colorectal cancer. Given that Frizzled receptors have seven hydrophobic transmembrane domains together with genetic and biochemical data linking G proteins to the Wnt signaling, have long supported the idea that Frizzled proteins interact with G proteins. The results of our previous experiments have shown that activation of G?q in Xenopus oocytes leads to inhibition of GSK3? and cellular stabilization of ?-Catenin.The results obtained from HEK293T mammalian cells were similar. In this study, we investigated the interaction between G?q signaling and ?-Catenin activity by using SW480 colon cancer cells. In order to study the effect of endogenous G?q on transcriptional activity of ?-Catenin, SW480 cells were treated with three agonists of G?q signaling including carbachol, thrombin and trypsin. Then, Real time-PCR and Reverse transcription-PCR were performed to measure the expression of some ?-Catenin target genes (CCND1, C-MYC, and FGF20). The results implied that carbachol, thrombin and trypsin did not have a significant effect on expression of these three genes.