عنوان پایان‌نامه
بررسی اثر سیلیبینین بر روی بیان ژن¬های چرخه سلولی و اپوپتوز در سلول¬های سرطانی اسفروئیدی
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم‌سلولی‌مولکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6597;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6597
- تاریخ دفاع
- ۲۴ شهریور ۱۳۹۵
- دانشجو
- شرمین لک
- استاد راهنما
- نسرین معتمد
- چکیده
- هدف : امروزه توجه زیادی به داروهای گیاهی به عنوان منبعی از داروها با عوارض جانبی کم می‌شود. سیلیبینین یک فلاونولیگنان استخراج شده از گیاه خار مریم است که اثر ضد سرطانی آن در سرطان‌های مختلف از قبیل پروستات، روده بزرگ و سرطان پستان ثابت شده است. اسفروئیدهای حاصل از کشت سه‌بعدی مدل‌های مهمی برای مطالعات سرطانی هستند. در مقایسه با سلول‌های کشت دوبعدی که به یک سطح پلاستیکی چسبیده اند، اسفروئیدهای حاصل از کشت سه بعدی برهمکنش سلول با سلول و سلول با ماتریکس خارج سلولی دارند و شباهت بیشتری به شرایط فیزیولوژیکی توده‌ِی تومور داخل بدن دارند. در نتیجه در این مطالعه بر آن شدیم تأثیر سیلیبینین بر روی توان حیاتی سلول‌ها و اثر ضد سرطانی آن را مورد بررسی قرار دهیم.روش: اسفروئیدها با غلظت‌های مختلفی از سیلیبینین (50، 100، 150، 200، 250، 300 و 350 میکرومولار بر میلی‌لیتر) در سه زمان 24، 48 و 72 ساعت تیمار شدند. با استفاده از روش MTT توان حیاتی اسفروئیدها و دوز 50% کشندگی سنجیده شد. با روش های RT-PCR و Real-Time PCR بیان ژن‌های P53، P21، PTEN و BCL2 اندازه گیری شد.نتایج : با روش MTT کاهش درصد توان حیاتی اسفروئیدها وابسته به زمان وغلظت مشاهده شد. نتایج حاصل از RT-PCR و Real-Time PCR نشان داد که سیلیبینین اثر مهاری بر روی توان حیاتی اسفروئیدها از طریق افزایش بیان P53 وکاهش بیان BCL-2 دارد. اما تأثیر این دارو بر روی بیان ژن‌های P21 و PTEN به صورت معنادار مشاهده نشد.نتیجه گیری :یلیبینین باعث کاهش توان حیاتی سلول‌ها و افزایش آپوپتوز در اسفروئیدهای MCF-7 می‌شود. این نتایج نشان می‌دهد که سیلیبینین می‌تواند یک داروی مکمل مهم در سرطان پستان باشد.
- Abstract
- Purpose: Nowadays herbal-derived medicines are attracting attention as new sources of drugs have few side effects. Silibinin is a major bioactive flavo-nolignan extracted from milk thistle with chemopreventive activity against various cancers such as prostate, lung, clon and breast cancer. Three-dimensional spheroid culture models are increasingly used as essential tools in cancer research as they allow cellular responses that mimic the in vitro events. Compared to monolayer cultures on conventional 2-D plastic surfaces, spheroid culture models provide a physiological context wich more closely mimics tumor microenvironment. In this study, we investigated the effect of Silibinin on cell viability, anti cancer effect through modulation of P53, P21, Bcl-2 and PTEN gene expression in MCF-7 spheroids.Methods: Spheroids were treated with various concentrations of silibinin (50,100,150,200,250,300 and 350µ M) for 24, 48 and 72 h. Cell viability was assessed using MTT assay and IC50 valu was determined, RT-PCR and Real time PCR methods were also used in order to determine P53, P21, Bcl-2 and PTEN gene expression in cancer cells.Results: A dose and time dependent reduction in viability was observed in Spheroids treated with silibinin. RT-PCR and Real-Time PCR results showed that silibinin had inhibitory effect on viability via up-regulation of P53 and downregulation of Bcl-2. However, silibinin has no effect on P21 and PTEN gene expression in MCF-7 spheroids.Conclusion: Silibinin induced a reduction in cell viability and apoptotic cell death in MCF-7 spheroids. These results suggest that silibinin can be an important supplemental agent for treating patients with breast cancer.Key words: MCF-7, silibinin, Apoptosis, Three dimensional spheroid culture
