عنوان پایان‌نامه
انتقال ژن اینترفرون کاما به گیاه کلزا با استفاده از روش اکروباکتریوم وآنالیز گیاهان ترایخت
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی-اصلاح نباتات
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 41951;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 260
- تاریخ دفاع
- ۲۳ اردیبهشت ۱۳۸۸
- دانشجو
- پویا رحیمی فردهمدانی
- استاد راهنما
- سیداحمد سادات نوری
- چکیده
- استفاده از گیاهان برای اهداف داروئی به هزاران سال پیش برمی‌گردد اما مهندسی ژنتیک گیاهان به منظور تولید داروهای بیولوژیکی و نوترکیب موضوع جدیدی می‌باشد. تقاضای روزافزون به داروهای بیولوژیکی و در عین حال قیمت بالا، دسترسی به آنها را محدود می‌کند، بنابراین لازم است برنامه‌ریزی های لازم صورت پذیرد که به میزان زیاد و با هزینه کمتر در دسترس مردم قرار گیرند. پروتئینهای نوترکیب در اندامهای مختلف گیاهی مثل برگ، بذر، بافتهای ذخیره رویشی مثل غده تولید شده اند. ولی به چند دلیل بذر گیاهان برای بیان پروتئینهای نوترکیب بیشتر مورد توجه هستند. از جمله مهمترین آنها، افزایش پایداری پروتئین، تجمع بالای پروتئین در حجم کوچک و ذخیره سازی راحت آن، استخراج نسبتا راحت به دلیل کم بودن ترکیبات فنولیک و کمپلکسهای پروتئینی آن است. اینترفرونها علاوه بر اثرات ضدویروسی فعالیتهای بیولوژیکی متعدد مثل اثر ضد غدد سرطانی، تنظیم پاسخهای ایمنی، تاثیر روی رشد و تمایز سلولی، تغییر فعالیتهای سلولی و اثر ضد تکثیر سلولی دارند. در این تحقیق از و باکتری خاکزی آگروباکتریوم تومه فاسینس سویه LBA4404 به منظور انتقال ژن به سلول‌های گیاهی استفاده شد.از پلاسمید pBI121 به عنوان ناقل برای انتقال INF? به گیاه استفاده شد. از برگهای جوان گیاهان (تراریخت و شاهد) DNA ژنومی بر اساس روش دلاپورتا(Dellaporta, 1983) استخراج و سپس با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن INF? واکنش PCR انجام و گیاهان تراریخت گزینش شدند. به منظور بررسی آنالیز گیاهان تراریخت در سطح DNAو اطمینان از انتقال ژن هدف به گیاهان تراریخت، پس از استخراج DNA ژنومی از برگ گیاهان نسل اول (T0) و شاهد، PCR با آغازگرهای اختصاصی ژن INF? انجام شد و قطعه bp 500 مربوط به ژن INF? مشاهده شد در حالیکه در گیاه شاهد چنین باندی مشاهده نشد.
- Abstract
- The most important factor for commercialization is increasing recombinant protein production. One important Strategy to increase recombinant protein yield in plants include improvement of protein stability and accumulation by targeting to suitable tissue and using specific subcellular targeting signals. The ER contain different molecular chaperons and isomerase for folding of nascent proteins, which can prevent aggregation and formation of incorrect three dimensional structure and promote correct protein folding leading to recombinant protein stability and accumulation. In this perspective, seed-based platforms are particularly attractive because they allow recombinant proteins to stably accumulate at a relatively high concentration in a compact biomass, which is beneficial for extraction and downstream processing. In this research for human Gamma interferon expression in Brassica napus seeds and targeting it into ER, we used seed specific promoter (Napin) and C-terminal KDEL sequence (ER retention signal). The construct was cloned in pBI121 plant expression vector. Cotyledon explants and A. tumefaciens were used for plant transformation. The transformed plants were screened on antibiotic-contained media. Analysis of transgenic plants was done by PCR. Finally the presence of INF-? was improved by a 500bp band in agarose gel electrophoresis.
