عنوان پایان‌نامه
انجماد اسپرم بز با استفاده از یک رقیق کننده بر پایه نانو ذره لسیتین
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 6202;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 66793
- تاریخ دفاع
- ۳۰ شهریور ۱۳۹۳
- دانشجو
- طوبی ندری
- استاد راهنما
- آرمین توحیدی, سعید زین الدینی
- چکیده
- در طی سال¬های گذشته کوشش¬هایی برای جایگزینی زرده تخم مرغ با لسیتین سویا در رقیق¬کننده اسپرم بز صورت گرفته است که البته کیفیت اسپرم منجمد- ذوب شده بالاتر از زرده تخم مرغ نبوده است. در این مطالعه فرض بر این است که کاهش اندازه ذرات لسیتین در حد نانو بتواند کارایی بهتری در انجماد اسپرم اعمال نماید. برای ارزیابی اثر نانوذره لسیتین سویا بر انجماد پذیری اسپرم بز، نمونه‌های منی از چهار بز نر نژاد مهابادی با استفاده از مهبل مصنوعی جمع آوری شد و پس از آن در رقیق¬کننده¬های بر پایه¬ی زرده¬ تخم مرغ، چهار سطح مختلف لسیتین سویا (1، 2، 3 و 4 ) و چهار سطح مختلف نانوذره لسیتین (1، 2، 3 و 4)، رقیق و پس از سردسازی در پایوت‌های 25/0 میلی‌لیتری منجمد شدند. این آزمایش در شش نوبت و به صورت هفته¬ای یک¬بار تکرار شد. بعد از فرآیند انجماد– یخ¬گشایی، جنبایی (CASA)، زنده¬مانی، یکپارچگی غشاء (HOST)، اسپرم‌های غیر¬طبیعی (هانکوک)، جا¬بجایی فسفاتیدیل سرین غشایی (تست آپوپتوزیس) مورد ارزیابی قرار گرفت. داده¬ها با نرم افزار SAS و با رویه GLM در قالب طرح کاملا تصادفی تجزیه و تحلیل شد. نتایج نشان داد که رقیق¬کننده¬ی حاوی دو درصد نانوذره لسیتین بیشترین جنبایی را داشت (33/66) اگرچه اختلاف معنی¬داری با زرده تخم مرغ (38/63) نداشت. همچنین، گروه حاوی دو درصد نانوذره لسیتین بالاترین درصد جنبایی پیش¬رونده را به خود اختصاص داد (83/47) هر چند که با زرده تخم مرغ (16/47) اختلاف معنی¬داری نداشت. همچنین، این رقیق¬کننده بیشترین اسپرم زنده را داشت (87/68)، اگرچه اختلاف معنی¬داری با زرده تخم مرغ (06/64) نداشت. بیشترین درصد اسپرم با غشای یکپارچه نیز مربوط به رقیق¬کننده حاوی دو درصد نانوذره لسیتین (92/65) بود، اگرچه اختلاف معنی¬داری با زرده تخم مرغ (16/62) نداشت. از نظر ریخت¬شناختی بیشترین درصد اسپرم طبیعی مربوط به رقیق¬کننده زرده تخم مرغ بود اگرچه با سایر رقیق¬کننده¬ها اختلاف معنی¬داری نداشت اما با اختلاف معنی¬داری از رقیق¬کننده چهار درصد لسیتین بالاتر بود. رقیق کننده¬های مختلف اختلاف معنی¬داری باهم نداشتند. همچنین، نتایج تست آپوپتوزیس نشان داد که رقیق کننده حاوی دو درصد نانوذره لسیتین بیشترین درصد زنده¬مانی (73/81) و کمترین درصد اسپرم مرده (26/18) نسبت به زرده تخم مرغ با درصد زنده¬مانی (7/70) و درصد اسپرم¬های مرده (29/29) را به خود اختصاص داده است. بنابر این، به نظر می¬رسد که کاهش ذرات لسیتین در حد نانو می¬تواند اثرات مفیدی در کارایی لسیتین در حفاظت اسپرم طی فرایند انجماد- ذوب برجای گذارد.
- Abstract
- During the past years, efforts has been performed for replacing egg yolk with soybean lecithin in goat semen extender, however, the quality of frozen-thawed semen was not higher than egg yolk. In this experiment assumed that reducing lecithin particles size, in nano extent, can make better semen cryopreservation efficiency. Therefore, in this study semen sample of four Mahabadi male goats were collected using artificial vagina in order to evaluate the effect of soybean lecithin nanoparticles on goat sperm cryopreservation, then these samples were diluted in the extenders egg yolk-basis, four different levels (1, 2, 3 and 4) of soybean lecithin and four different levels (1, 2, 3 and 4) of lecithin nanoparticles and then were frozen in 0.25 mm Payots after cooling. This experiment was repeated six times and once a week. After freeze-thawing process, motility (CASA), the viability, membrane integrity (HOST), abnormal sperm (Hancock), serine phosphatidylinositol membrane translocation (annexin) were evaluated. Data were analyzed in a completely randomized design using SAS software and GLM procedure (P <0.05). Results of this study showed that %2 nanoparticle lecithin extender had the highest motility (66.33), but it did not show significant difference compared to egg yolk (38.63). Also %2 nanoparticle lecithin extender showed the highest percentage of progressive motility (47.83), although it did not show significant differences with egg yolk (47.16). As well as, this extender had the highest number of live sperm (87.68), which was significantly different from egg yolk (64.06). In addition, the highest percentage of sperm with integrated membrane was found in %2 nanoparticle lecithin extender (65.92), but it had not significant difference with egg yolk (62.16. Morphologically, the highest percentage of normal sperm was in egg yolk extender. Although had no significant difference with other extenders but significantly was higher than four percent lecithin extender. There was no significant difference between various extenders.The results of apoptosis test, also, showed that %2 nanoparticle lecithin extender has the highest percentage of viability with the lowest percentage of dead sperm. So it seems that, reducing lecithin particles size, in nano extent, have useful effect on lecithin for protection from goat sperm during the freezing and thawing process.
