عنوان پایان‌نامه
تاثیر مصرف پروبیوتیک های لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس و بیفیدوباکتریوم بیفیدوم بر تغییر بیان میکروRNA و ژنهای درگیر درمدل حیوانی سرطان کلورکتال
- رشته تحصیلی
- بیوتکنولوژی-میکروبی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده علوم و فنون نوین شماره ثبت: 179;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 67092
- تاریخ دفاع
- ۲۹ شهریور ۱۳۹۳
- دانشجو
- زهرا حیدری
- استاد راهنما
- مهدی رهایی جهرمی
- چکیده
- سرطان کلورکتال چهارمین سرطان شایع در جهان و سومین سرطان شایع در ایران است. با توجه به این که روش های درمانی مورد استفاده برای سرطان دارای عوارض نامطلوب بسیاری میباشند، لذا استفاده از روش های درمان بیولوژیکی و بدون عوارض جانبی، از جمله مصرف پروبیوتیک، راهکاری مطلوب تر برای درمان این بیماری محسوب می شود. در این پژوهش، 13 سر موش نر نژاد Balb/c جهت بررسی اثرات مصرف خوراکی پروبیوتیک های لاکتوباسیل اسیدوفیل و بیفیدیوباکتریوم بیفیدیوم بر تغییر بیان گروهی از ژن ها و میکروآرانآهای درگیر در مسیرهای پیامرسانی سرطان کولون، به چهار گروه شامل کنترل، کانسروژنیک، تغذیه با پروبیوتیک لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس و بیفیدیوباکتریوم بیفیدوم تقسیم شدند. بهغیر از گروه کنترل بقیه حیوانات، داروی کارسینوژنیک آزوکسی متان ) 31 میلیگرم برکیلوگرم وزن بدن( به صورت هفتگی به مدت 1 هفته متوالی برای ایجاد مدل سرطان کولون دریافت نمودند. گروههای سوم و چهارم به ترتیب پروبیوتیکهای لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس و بیفیدیوباکتریوم بیفیدیوم )روزانه پنج گرم در 966 سی سی آب مصرفی( از 36 روز قبل از تجویز آزوکسیمتان تا پنج ماه بعد از آن دریافت نمودند. گروههای اول و دوم فقط از آب معمولی در این مدت استفاده کردند. در پایان، بافتهای کولون، کبد و پلاسما جهت بررسی بیان microRNA های miR-18a-5p ، miR-135b ، miR-122-5p ، miR-221-3p ، miR-200c-3p ، miR-155-5p و miR-26b-5p و ژنهای APC ، KRAS ، PTEN ، COX-2 ، PU.1 ، ZEB-2 و Bcl-W جدا شدند. به منظور بررسی بیان 31 ژن کاندیدا، ابتدا RNA کل استخراج و پس از سنتز cDNA ، آزمون Real Time PCR انجام گردید. نتایج بدست آمده نشان میدهدکه miR-200c-3p و COX-2 در بافت کولون، ژن PTEN در بافت کبد و miR-155-5p و PTEN در پلاسما تغییرات معنیدار داشته و میتواند کاندیدای مناسبی به عنوان نشانگر مولکولی برای بررسی تاٌثیر سرطان کولورکتال بر پروفایل بیان ژن داشته باشد. همچنین miR-26b-5p و miR-200c-3p و ژنهای COX-2 ، ZEB-2 و APC در بافت کولون، miR-18a-3p و Bcl-W در بافت کبد و miR-155-5p و PTEN در پلاسما میتواند به عنوان کاندیدا برای مطالعهی اثرات پروبیوتیک در سرطان کولورکتال مورد توجه قرار گیرد؛ چرا که تغییرات بیان آنها از لحاظ آماری معنیدار بوده است. همچنین مشخص شد که پروبیوتیک بیفیدیوباکتریوم بیفیدوم در بافت کولون تغییرات بیانی معنیداری نسبت به لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس ایجاد کرده و در بیان ژنهای مؤثر در این بافت تاٌثیر گذارتر بوده، در حالی که در بافت کبد هر دو پروبیوتیک مؤثر بوده اند. در پلاسما نیز پروبیوتیک لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس مؤثرتر از بیفیدیوباکتریوم بیفیدوم عمل کرده است. در کل، نتایج این تحقیق نشان داد که میتوان برای مطالعهی تاٌثیر پروبیوتیک بر کاهش پیشرفت و یا متوقف کردن فرایند سرطان، می توان از داده های پروفایل ژن های خاصی استفاده نمود. کلمات کلیدی: سرطان کولون، پروبیوتیک، آنالیز بیان ژن، لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس، بیفیدیوباکتریوم بیفیدوم.
- Abstract
- Colorectal cancer is the fourth most common cancer in the world and third kind of cancer in Iran. As the techniques used for cancer therapy, have undesirable effects, therefore, application of biological treatments without side effects, including probiotics consuming, is more suitable approach for the disease treatment. In this study, 38 male mice of Balb/c race to study the effects of oral use of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium bifidum on the expression of a list of genes and microRNAs involved in signal transduction pathways in colorectal cancer, divided to 4 groups, including, control, carcinogenic , nutrition by probiotics, L. acidophilus and B. bifidum, groups. Expect for control group, other animals received carcinogenic agent, azoxymethane (15 mg kg body weight) as weekly for 3 consecutive weeks to create a model of colon cancer. Groups III and IV received respectively, Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium bifidum (5gr/200cc of water per day) from ten days before administLeveln of azoxymethane to five months after it. Group I and II received only tap water during the experiment. In the end, colon, liver and plasma tissues were isolated to evaluate the expression of microRNAs, miR-18a-5p, miR-135b, miR-122-5p, miR-221-3p, miR-200c-3p, miR-155-5p and miR-26b-5p and the genes, APC, KRAS, PTEN, COX-2, PU.1, ZEB-2 and Bcl-W. To analyze the expression of 14 candidate genes, first, total RNA was extracted and after cDNA synthesis, Real Time PCR assay was performed. The results showed that in the colon tissue, mir-200c-3p and COX-2, PTEN in liver and mir-155-5p and PTEN in plasma changed, significantly, then, they can be consided as molecular marker for evaluating of colorectal cancer effects on gene expression profile. Also, miR-26b-5p, miR-200c-3p, COX-2, ZEB-2 and APC in colon, miR-18a-3p and Bcl-W in liver, miR-155-5p and PTEN in plasma can be considered as candidate to study of probiotics effects in colorectal cancer due to their significant expression changes. Also, it found, Bifidobacterium bifidum showed expression changes more significant than Lactobacillus acidophilus in colon tissue and was more effective on expression of genes, while both were effective in liver and in plasma, Lactobacillus acidophilus acts more effective than Bifidobacterium bifidum. In conclusion, the results showed to evaluate of probiotics effect on cancer progress reducing or stopping, it can be used from specific genes expression profiling data. Keywords: colorectal cancer, Probiotic, gene expression analysis, Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium bifidum
