عنوان پایان‌نامه
تعیین نسبت کروموزوم جنسی در منی گاو با استفاده از روش real time
- رشته تحصیلی
- علوم دامی - ژنتیک و اصلاح نژاد دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 46176;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 435
- تاریخ دفاع
- ۰۵ اسفند ۱۳۸۷
- دانشجو
- ونداد خزائلی
- استاد راهنما
- عبدالرضا صالحی
- چکیده
- پیش انتخاب جنسی در گوساله ها تاثیر بسزایی در پیشرفت گله های شیری و گوشتی دارد. یکی از بهترین راهها برای پیش انتخاب جنسی گوساله ها استفاده از منی سکس شده می باشد. میزان استفاده از منی سکس شده شدیدا به درجه خلوص آنها وابسته است بنا بر این بعد از اینکه عملیات جداسازی انجام شد، می بایست با روشی خلوص منی بدست آمده ارزیابی شود. در این تحقیق برای ارزیابی منی سکس شده، اقدام به ابداع روشی سریع، قابل اطمینان، تکرار پذیر و اقتصادی بوسیله دستگاهReal Time PCR، شده و همچنین بمنظور کاهش هزینه ها، رنگ SYBR Green به جای پروب به کار رفته است. با استفاده از پرایمر های مخصوص ژن SRY (توالی ویژه کروموزوم Y) و ژن B-actin (بعنوان ژن داخلی و بر روی کروموزوم 25) بر روی دو نمونه اسپرم (ژن هدف) و خون (ژن مرجع) ، آزمون Real Time PCR انجام شد. درصد اسپرم های حامل کروموزوم Y با استفاده از فرمول Ct?? (روش لیواک) محاسبه شد. در اینجا با استفاده از روش SYBR Green Real Time PCR میزان اسپرم های حامل کروموزوم Y را نسبت به کل اسپرم ها ( (Y کروموزوم حامل های اسپرم)/(ها اسپرم کل) )محاسبه شده و برای این منظور نسبت قطعه ای غیر تکراری در کروموزوم Y به قطعه غیر تکراری دیگری در کروموزوم های اتوزوم ( (SRY ژن میزان)/(B-a ژن میزان) )، مورد محاسبه قرار می گیرد. (SRY?(B-a) اسپرم)/(SRY?(B-a) خون ) = 2^(-??Ct) Ct= ?Ct (Sperm) – ?Ct (Blood)?? ?Ct?_(B-a))- (?Ct?_SRY- (?Ct?_(B-a)-Ct = (?Ct?_SRY?? کلمات کلیدی : Real Time PCR، SYBR Green، منی سکس شده، اسپرم گاو، پیش انتخاب جنسی
- Abstract
- Sex preselection in bovine offspring has an important role in dairy and beef cattle herds improvement. One of the best ways to preselect the offsprings is to use sexed semen. The sexed sperm demand is intensively related to the sexed semen purity, therefore after the semen was sexed, a sex ratio determination must be accomplished. The aim of this study was to develope a fast, reliable, repeatable and economic procedure to be used for the evaluation of the sexed semen employing Real Time PCR. in order to reduce the costs, SYBR Green dye was also used instead of probes Real Time PCR were performed using primers specific for SRY (Y chromosome specific sequence) and B-actin (as an endogenous gene, located on chromosome 25) genes on both semen (interest gene) and blood (reference gene) specimen. The percentages of Y and X chromosome bearing sperms were determined applying ??Ct formula (Livak Method). Here, with SYBR Green Real Time PCR method, (Y chromosome bearing sperms)/(The whole sperms) is calculated and in order to do such calculation, the amount of a unique sequence in Y chromosome (SRY) and an autosomal chromosome (B-a) must be estimated ((Amount of SRY gene)/(Amount of B-a gene)) . (SRY?(B-a) اسپرم)/(SRY?(B-a) خون ) = 2^(-??Ct) Ct= ?Ct (Sperm) – ?Ct (Blood)?? ?Ct?_(B-a))- (?Ct?_SRY- (?Ct?_(B-a)-Ct = (?Ct?_SRY?? Key words : Real Time PCR, SYBR Green Dye, Sexed semen, Bovine sperm, Sex preselection.
