عنوان پایان‌نامه
مطالعه بیان رسپتور شبه تیروزین کینازی نوع ۲ (ROR۲) و ارتباطش با میزان بیان Wnt۵a در دودمانهای سلولی انسانی سرطان تخمدان SKOV-۳ و OVCAR-۳
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم جانوری - تکوینی جانوری
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5732;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 69216
- تاریخ دفاع
- ۱۸ شهریور ۱۳۹۳
- دانشجو
- زهرا صالحی دولابی
- استاد راهنما
- قمرتاج حسین
- چکیده
- سرطان تخمدان هفتمین عامل مرگ¬و¬میر در بین زنان در جهان می¬باشد. مولکول¬های Wnt توسط مسیرهای پیام¬رسانی متفاوتی در فرآیند¬هایی از جمله تمایز، رشد، آپوپتوز، قطبیت سلولی در تکوین جنینی، در بافت¬ بالغ و انواع زیادی از سرطان¬ها نقش کلیدی ایفا می¬کنند. رسپتورهای متفاوتی با Wnt5a برهمکنش دارند از جمله Frizzledها، رسپتور تیروزین کینازی اورفان ROR2 که مسیر غیرقانونمند پیام¬رسانی Wnt را از طریق افزایش Ca2+ داخل سلولی، فعال¬کردن مسیر JNK و یا فعال¬کردن RhoGTPaseها میانجی¬گری می¬کند. به¬خوبی شناخته¬شده که دودمان¬های سلولی سرطان تخمدان میزان بالایی Wnt5a را بیان می¬کنند اما مسیر پیام¬رسانی آن هنوز شناخته نشده است. مطالعه حاضر سه هدف دارد که عبارتند از: 1)بررسی بیان ROR2 در دودمان¬های سلولی سرطان تخمدان 2)مطالعه تاثیر بیان Wnt5a بر بیان ROR2 و 3)درک نقش مسیر Wnt5a/ROR2 در مهاجرت دودمان¬های سلولی سرطان تخمدان در دودمان¬های سلولی SKOV-3 و OVCAR-3 سرطان تخمدان سطح بیان ROR2 توسط وسترن¬بلات و در سلول¬های ترانسفکت شده با siRNA Wnt5a سطح بیان ROR2 با استفاده از وسترن¬بلات و ایمونوفلورسنس مورد بررسی قرار¬گرفت. در نهایت برای بررسی تاثیر تغییرات ترشح مولکول¬های Wnt بر سطح بیان ROR2 از مهارکننده ترشح Wnt نوع 2(IWP-2) استفاده¬گردید. نتایج ما نشان می¬دهد که دودمان¬های سلولی سرطان تخمدان سطح بالایی از Wnt5a و رسپتور ROR2 را بیان می¬کند. بیان رسپتور ROR2 بیشتر محدود به غشای پلاسمایی می¬باشد. فقدان بیان Wnt5a قویا بر سطح بیان ROR2 تاثیر می¬گذارد به این صورت که کاهش 70% بیان Wnt5a منجر به کاهش بیان رسپتور ROR2 در هر دو دودمان سلولی ( بیش تر از 90% کاهش بیان رسپتور ROR2، P<.01) می¬شود. تست مهاجرت نشان می¬دهد که فقدان بیان Wnt5a یا مهار عملکرد رسپتور ROR2 توسط آنتی¬بادی علیه ROR2 منجر به کاهش 30% مهاجرت می¬شود. سلول¬های ترانسفکت شده با siRNA Wnt5a در حضور یا غیاب آنتی¬بادی علیه ROR2 به ترتیب کاهش 67% تا 80% مهاجرت سلولی را نشان می¬دهد. به علاوه ما قبلا نشان¬دادیم که IWP-2 می¬تواند مهاجرت سلول¬های سرطان تخمدان را القا کند. این امر جالب توجه است که سطح Wnt5a و ROR2 در حضور IWP-2 در دودمان سلولی SKOV-3 به ترتیب 5/1-برابر و 6/1-برابر افزایش می¬یابد. نتایج مشابهی برای دودمان سلولی OVCAR-3 به¬دست آمده¬است با این تفاوت که سطح بیان ROR2 به شدت افزایش یافته¬است (8/7-برابر و P<.01). در نهایت نتایج ما نشان می¬دهد که بیان ROR2 در دودمان¬های سلولی سرطان تخمدان تحت کنترل سطح بیان Wnt5a می¬باشد و هم¬چنین مسیر پیام رسانی Wnt5a-ROR2 می تواند در مهاجرت سلول¬های سرطان تخمدان نقش مهمی ایفا کند. کلمات کلیدی: IWP-2 ، ROR2 ، WNT5a ، مهاجرت
- Abstract
- Ovarian cancer is the 7th cause of mortality among women in the worldwide. Due to lack of symptoms it is diagnosed lately and this led to its high mortality rate. Wnt molecules via different pathways of signaling play a key role in various important processes like differentiation, growth, apoptosis and polarity in development, adult tissue and in many types of cancer. Wnt5a mediates its effect mainly via non-canonical signaling which involves increased intracellular Ca+2, JNK pathway or RhoGTPases activities. Different types of receptors may interact with Wnt5a including the typical Wnt receptors named as Frizzled or orphan tyrosine kinase receptor, ROR2 which is a transmembrane receptor mediating non-canonical Wnt signaling. It is well known that ovarian cancer cell lines express high levels of Wnt5a but its signaling pathway remains largely unknown. The aim of the present study is three fold: i) to determine whether ovarian cancer cell lines expresses ROR2 ii) whether ROR2 expression could be modulated by Wnt5a expression level and iii) to understand the role Wnt5a/ROR2 pathway in migration of ovarian cancer cell lines. To this end OVCAR-3 and SKOV-3 cell lines were assessed for ROR2 expression by western blotting and cells were transfected with siRNA Wnt5a for further assessment of ROR2 levels by western blotting and immunofluorescence. Finally, in order to see how alteration in Wnt molecules secretion may affect ROR2 expression levels, we have used Inhibitor of Wnt production type-2 (IWP-2) a small molecule that inhibits Wnt secretion which may be importat for biological effect of many Wnts. Our results showed that both ovarian cancer cell lines expresses high to moderate levels of Wnt5a and ROR2 receptor. ROR2 receptor was localized around cells in plasma membrane. Moreover knock down of Wnt5a expression influence strongly ROR2 expression levels as 70% Wnt5a decreased levels led to strong inhibition of ROR2 receptor in both cell lines (> 90% decreased expression of ROR2 receptor, P<.01). Migration assay showed that knock down of Wnt5a expression or inhibition of ROR2 receptor function by Rabit polyclonal anti-human antibody ROR2 led to almost 30% decreased migration index. However, transfected cells with siRNA Wnt5a in the absence or presence of anti ROR2 antibody showed 67% to 80% decreased cell migration, respectively. In addition, we have previously shown that IWP-2 could induce ovarian cancer cells migration. It is interesting to note here, that both Wnt5a and ROR2 levels were increased by 1.5-fold and 1.6-fold (P<.05) in SKOV-3 cell line in the presence of IWP-2. Similar results was observed for OVCAR-3 cells except that ROR2 expression levels was highly increased (by 7.8-fold, P<.01)). In conclusion, our data showed ROR2 expression by ovarian cancer cell lines, which could be under control of Wnt5a levels and important role of Wnt5a/ROR2 signaling in ovarian cancer cells.
