عنوان پایان‌نامه
طراحی فرایند ساخت سامانه تشخیصی مورفین بر پایه تکنیک ال.اف ایبا استفاده از مهندسی سطح بستر
- رشته تحصیلی
- مهندسی شیمی-داروسازی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس یک فنی شماره ثبت: 1550.;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 67026
- تاریخ دفاع
- ۰۸ تیر ۱۳۹۳
- دانشجو
- حسنا شاملواحمدی
- چکیده
- مورفین یک ماده مخدر پر مصرف و رایج به ویژه در جوامع درحال توسعه است و آمار افرادی که به طور مستقیم مورفین مصرف می کنند و یا از طریق استعمال مداوم داروهای حاوی مواد مخدر، به مورفین معتاد شده اند به شکلی فزاینده در حال افزایش است. روش (LFA) Lateral Flow Assay یک تست تشخیص سریع اعتیاد است که به دلیل دارابودن مزایای قابل توجه خود، کاربرد فراوانی در زمینه شناسایی معتادین دارد. با این حال مسئله حساسیت و سطح تشخیص این روش همواره به عنوان محدودیتی در بهره گیری از آن مطرح بوده است. در این پژوهش برخی از شاخص های مؤثر بر سطح تشخیص(Cut off ) این روش که عبارتند از: pH کانژوگاسیون و OD ماده کانژوگه ، غلظتBSA - مورفین در باند تست، بلاک نمودن لایه کانژوگه قبل از اعمال ماده کانژوگه به آن،کیفیت رهایش ماده کانژوگه و نوع بستر مورد استفاده در لایه آنالیز، مورد بررسی قرار گرفت و تلاش شد تا با بهینه سازی هر یک، سطح تشخیص کیت تشخیص مورفین بهبود یابد. pH بهینه با استفاده از کیت “Gold in a box” تعیین شد. سپس با بررسی چهار بستر پرکاربرد شامل نیتروسلولز، سلولز، نایلون و PVDF، تأثیر فعال سازی بستر در افزایش ظرفیت آن برای تثبیت آنتی بادی مطالعه شد و بستر مناسب برای ساخت کیت تشخیص مورفین تعیین گردید. در ادامه طی مراحلی، غلظت بهینه BSA - مورفین در باند تست و OD بهینه ماده کانژوگه تعیین گردید و تأثیر دو فاکتور بلوکه نمودن لایه کانژوگه و افزودن یا عدم افزودن قند به ماده کانژوگه نیز مورد بررسی قرار گرفت. نتیجه آزمایش ها 4/8=pH و 1=OD را به عنوان مقادیر بهینه نشان می داد و غلظت بهینه BSA - مورفین در باند تست نیز برابر mg/ml 5/0 برآورد شد. در نهایت سطح تشخیص کیت بهینه سازی شده به میزان ng/ml25 رسید. پس از مقایسه نتایج حاصل ازکیت های بهینه شده با یک نوع کیت استاندارد، حساسیت و اختصاصیت این کیت ها به ترتیب برابر 100 و 99 درصد به دست آمد که مؤید موفقیت آمیز بودن مراحل بهینه سازی بود. بنابراین یافتن شاخص های مؤثر بر سطح تشخیص روش لترال فلو و بهینه سازی آن ها یکی از مهم ترین راهکارهای بهبود حساسیت و سطح تشخیص این روش می باشد.
- Abstract
- Morphine is an opioid commonly used, especially in developing countries. People who take morphine statistics directly or through continuous use of medications containing narcotics, morphine addicts are increasingly on the rise. Lateral Flow Assay method is a test for rapid detection of morphine that has many applications in addicts identifying. However, the level detection has been a limit for it. This research examines how to improve level detection and sensitivity of this system. In this study, some of the factors affecting the Cut off value of this method including pH of conjugation process and OD of conjugated substance that is placed on conjugated substrates, Concentration of morphine- BSA immobilized in the test band, Blocking the conjugated pad before application of the conjugated material, type of substrate used in the analysis layer And Quality delivery of conjugated, Try to optimize each kit detects morphine levels improve. The optimum pH of conjugation process using the kit "Gold in a box" was set.Then were studied four widely used platform including nitrocellulose, cellulose, nylon and PVDF and Activating effect in the context of increasing its capacity to stabilize antibodies and appropriate bed for morphine detection kit was determined. By applying a diluted solution of morphine, first with supposing the fixed concentration for morphine-BSA, optimal OD was set. Then the optimal concentration of morphine-BSA was obtained in a fixed amount of OD. The effect of conjugated pad blocking and Quality delivery of conjugated also were studied. optimum value of pH and OD was pH=8.4 and OD=1 and optimum concentration of morphine-BSA was obtained at 0.5 mg/ml. Cut-off value of optimized kit attaining 25 ng/ml. After comparing the results with a standard kit, sensitivity and specificity of optimized kits are equal to 100% and 99% respectively. Finding and optimizing the factors affecting the performance of diagnostic lateral flow method can be effective strategy to increase the sensitivity and reduce the detection level of this system.
