عنوان پایان‌نامه
تولید آنتی بادی مونوکلونال بر علیه توکسین ریسین
- رشته تحصیلی
- بیوتکنولوژی-میکروبی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 65918;کتابخانه دانشکده علوم و فنون نوین شماره ثبت: 143
- تاریخ دفاع
- ۲۹ شهریور ۱۳۹۳
- دانشجو
- امین سلیمانی فر
- استاد راهنما
- جواد محمد نژاد آروق, محمد برشان تشنیزی
- چکیده
- هدف: ریسین یک گلیکوپروتئین سمی است که از دانه های روغنی گیاه کرچک مشتق می‌شود؛ این سم از یک زنجیره A (kDa32) که بوسیله یک اتصال دی سولفیدی به یک زنجیره B (kDa34) اتصال یافته تشکیل شده است. زیرواحد B به گلیکوپروتئین‌های روی سطح سلول‌های اپیتلیال متصل می‌شود، و زیر واحد A را قادر می‌سازد تا از طریق اندوسیتوز وابسته به گیرنده به داخل سلول وارد شود. این زیرواحد RNA ریبوزومی را بوسیله دپورینه کردن یک باقی مانده ریبوزومی ویژه غیرفعال می‌کند، در نتیجه سنتز پروتئین مهار می شود. ریسین یک سلاح بالقوه برای بیوتروریسیم است و از آن می‌توان برای نابودی جمعیت‌ها استفاده کرد. هدف از انجام این مطالعه تولید آنتی‌بادی مونوکلونال بر علیه ریسین است. روش: در این مطالعه از سه موش نژاد BALB/c ماده 6 تا 8 هفته‌ای استفاده شد. پروتئین مورد استفاده ریسین استخراج شده از دانه‌های کرچک و پپتیدهای سنتتیک اپی‌توپ‌های ریسین بود. تزریق اولیه و تزریقات یادآور بعدی به صورت داخل صفاقی انجام شد. پس از ایمونیزاسیون و تعیین تیتر آنتی‌بادی در سرم موش‌ها سلول‌های طحال موش و سلول‌های Sp2/0 با استفاده از پلی‌اتیلن گلیکول با یکدیگر ادغام شدند. پس از فیوژن و رشد کلون‌های مترشحه آنتی‌بادی، 5 کلون که سوپرناتانت آن‌ها با ریسین واکنش مثبت داشتند انتخاب شدند و رقیق سازی متوالی بر روی آن‌ها انجام شد. از بین این 5 کلون تنها دو کلون مترشحه آنتی بادی با تیتر بالا انتخاب شدند و رقیق سازی متوالی دوم بر روی آن‌ها انجام شد و یک کلون تولید کننده پایدار انتخاب شد. ترشح کلون‌ها بوسیله الایزای غیر مستقیم بررسی شد. نتایج: با مشاهده باندهای مورد نظر در تست SDS-PAGE صحت استخراج پروتئین مورد نظر تایید شد. نتایج حاصل از PCR کشت سلول، عدم آلودگی کشت‌ها را به مایکوپلاسما تایید کرد. در بین 5 کلون مترشحه آنتی‌بادی، تنها ترشح یک کلون پایدار بود. این کلون دوبار رقیق سازی حد شد و کلون نهایی بدست آمد.آنتی‌بادی ترشحی از کلاس IgG بود. لغات کلیدی: مونوکلونال آنتی‌بادی، ریسین، پپتید سنتتیک، بیوتروریسم
- Abstract
- Intruduction:Ricin is a toxic glycoprotein (toxalbumin) derived from the castor oil plant Ricinus communis it consists of a neutral A-Chain (32kDa) bound by a disulfide bond to an acidic BChain (34kDa). The B-subunit binds to glycoproteins on the surface of epithelial cells, enabling the A-subunit to enter the cell via receptor-mediated endo-cytosis. This subunit inactivates ribosomal RNA by depurinating a spe-cific ribosomal residue, thereby inhibiting protein synthesis. Ricin is a potential weapon for bioterrorism and can be used to destroy populations. The aim of this study was to produce monoclonal antibodies against Ricin. material and method: In this study were used three mices from BALB / c strain 6 to 8 weeks old. proteins used, were extracted ricin from castor seeds and synthetic peptides of ricin epitops. Initial injection and subsequent booster injection was administered intraperitoneally. after the immunization and Serum antibody titer mice spleen cells and Sp2 / 0 cells merged using polyethylene glycol. after the fusion and growing of antibody-secreting clones, 5 clones were selected that had a positive reaction with Risin supernatant and serial dilutions were performed on them. beetwin of five colons, only two clones selected that secreting antibodies with high titer and second serial dilution performed on them and A producer stable clone was selected. clones Secreting were analyzed by indirect ELISA. Results: After observing the desired bonds in the SDS-PAGE test, the accuracy of the exracted protein was verified. Results from the PCR reaction of the cell culture certified the incontamination of the cell cultures to micoplasma. Among the 5 secreting antibody colons, only one colon was stable. This colon was again diluted and the resulting final colon was a secreting antibody from the IgG class. key word: Monocolonal antibody, Ricin, synthetic peptide, bioterrorism
