عنوان پایان‌نامه
بیان پایدارژن اوره آز B از هلیکو باکتر پیلوری در گیاه توتون و کاهو
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی -بیوتکنولوژی کشاورزی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 6053;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 64711
- تاریخ دفاع
- ۲۳ شهریور ۱۳۹۳
- دانشجو
- محمد نبی زاده
- استاد راهنما
- هوشنگ علیزاده
- چکیده
- هلیکوباکتر پیلوری یکی از عوامل عمده ایجاد گاستریت مزمن،زخم های گوارشی و سرطان معده است.ایجاد واکسن علیه هلیکوباکترپیلوری، به عنوان راه حل مطلوب برای درمان و جلوگیری از عفونت باکتری در مجامع علمی مطرح شده‌است. زیرواحد ب ژن اوره¬آز موثرترین و رایج¬ترین ایمنوژن تمامی سویه‌های هلیکوباکترپیلوری است که قادر به ایجاد پاسخ ایمنی محافظتی در بدن حیوان و انسان علیه این باکتری می‌باشد. این آنتی¬ژن در دو سازه مجزا، که به ترتیب دارای توالی¬های هدایتگر آپوپلاستی و ادجوانت مخاطی در بالادست ژن بودند، همسانه‌سازی شده بود. در این پژوهش هر دوی این سازه¬هاپس از انتقال به اگرو¬باکتری و تایید باکتری¬های تراریخت،به صورت پایدار به گیاه توتون و سازه حاوی ادجوانت مخاطی به گیاه کاهو منتقل شدندکه گیاهان توتون مورد نظر در نسل To با استفاده از PCRتایید شده و پس از بذرگیری از گیاهان تراریخت،بذور آنها به منظور بررسی نسل T1 بر روی محیط انتخابی کشت شدند و گیاهچه¬های سبز و گیاهچه¬های سفید¬شده شمارش شدند و تفرق آنها بررسی شد.در نسل بعد گیاهچه¬هایی که بر روی محیط انتخابی قادر به رشد بودند،به منظور تایید حضور ژن مورد نظر به وسیله PCR ارزیابی شدند.ارزیابی بیان ژن در سطح ترنسکریپتوم باRT-PCR حضور رونوشت ژن مورد نظر را تایید کرده و با پی¬سی¬آر زمان واقعی بر روی گیاهچه¬های نسل T1 تفاوت میان لاین¬های مختلف تراریخت را به خوبی نشان داد و به نظر می¬رسد که احتمالا این تفاوت به دلیل اثر موضعی ویا تعداد متفاوت نسخه¬هایدرج¬شده از ژن اوره¬آز در ژنوم لاین¬های مختلف می¬باشد. در مورد گیاه کاهو،گیاه Toمورد نظر به وسیله PCRتایید شد سپس به منظور ارزیابی بیان در سطح رونویسی با استفاده از پی¬سی¬آر زمان واقعی مورد بررسی قرار گرفت.
- Abstract
- Helicobacter pylori is now assumed as one of the most infectious bacterial agents in producing chronic gastritis, peptic ulcers and gastric cancer, as well. Development of vaccine against such as infectious bacterial agent has been pharmacologically proposed as a reliable and appropriate tool to prevent its activity, worldwide. In this sense, B subunit of urease gene has been well-adapted as the most effective and promising way against all the strains of Helicobacterpylori. In the current study, two separated constructs containing this antigen were cloned, the first and second ones supplemented with apoplastic signal and mucosal adjuvant, respectively. Both constructs were employed and constitutively transferred into the tobacco plants through a popular transformation-based system called Agrobacterium tumefaciens. Nevertheless, on the subject of the second plant, lettuce, only the construct containg mucosal adjuvant was employed. In the following, all the T0 tobacco plants were confirmed through PCR and the obtained seeds were planted and analyzed in a selective medium and the transgenic plants were validated using PCR-based assay. the expression level of the B subunit of urease gene was also clarified by Using RT-PCR . A significant differences were observed among T1tobacco transgenic plants. Thosedifferences maybe due to the factors including positional effects and/or carrying one or more copy numbers of the corresponding gene (i.e., Urease gene) by each T1 tobacco transgenic plant. Regarding transgenic lettuce plants, only the T0 plants were employed and subsequent to PCR validation-based assay, the expression level of some selected lettuce transgenic plants was also assessed using RT-PCR.
